中文名称:细胞增殖示踪荧光探针(CFDA SE)
英文名称:Cell proliferation tracer fluorescence probe
产品规格:5mg
发货周期:1~3天
本品是一种近年来被广泛应用的细胞增殖检测用荧光探针,也可以用于细胞的荧光示踪。基于CFDA SE荧光标记的细胞增殖检测和[3H]-thymidine掺入、BrdU标记获得的检测结果完全一致,但同时可以提供更多的细胞增殖信息。使用CFDA SE检测可以提供整个细胞群中有多少比例的细胞分裂了1次、2次或更多次数,同时如果和其它荧光探针联用,可以获取不同分裂次数细胞的其它相关信息。
CAS:150347-59-4
分子式:C29H19NO11
分子量:557.47
CFDA SE可以通透细胞膜,进入细胞后可以被细胞内的酯酶(esterase)催化分解成CFSE,CFSE可以偶发性地(spontaneously)并不可逆地和细胞内蛋白的Lysine残基或其它氨基发生结合反应,并标记这些蛋白。在加入荧光探针CFDA SE后大约24小时,即可充分标记细胞。被CFDA SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定,稳定标记的时间可达数个月。CFDA SE标记细胞的荧光非常均一,比以使用的其它细胞示踪荧光探针例如PKH26的荧光更加均一,并且 分裂后的子代细胞的荧光分配也更均匀。
由于CFDA SE标记细胞的荧光非常均匀和稳定,每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半,这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞,分裂一次的细胞(1/2的荧光强度),分离两次的细胞(1/4的荧光强度),分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。采用CFDA SE通过流式细胞仪检测获得的检测结果参考右图。每一个峰代表一种分裂次数的细胞,从右至左的峰通常依次为分裂0次、1次、2次、3次等次数的细胞。分裂次数较多后,分裂0次或1次等没有分裂或分裂次数较少的细胞会逐渐减少直至检测不到。
使用CFDA SE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。目CFDA SE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。常用于淋巴细胞的增殖检测,也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测,甚至还可以用于细菌增殖的检测。
CFDA SE标记细胞呈绿色荧光,检测时的激发波长可以选择488nm,此时的发射波长为518nm,使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。CFDA SE标记的细胞也可以用荧光显微镜进行观察。 CFDA SE标记的细胞无论在体外还是体内都不会使邻近细胞染色。即CFDA SE荧光探针完成标记后不会从一个细胞转移到邻近细胞。CFDA SE标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞,佳标记时间需自行摸索。
CFDA SE可以使用无水DMSO(anhydrous DMSO)配制,配制浓度通常为2-10mM。配制好的溶液宜当天使用完毕,不宜长时间保存。CFDA SE标记细胞时的终浓度通常为0.2-10μM或更高一些。在工作浓度为5μM时,一个包装的本产品共可以标记约1.8升的细胞。
储存条件:-20℃,有效期6个月。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
镍 SP小鼠载脂蛋白A5(apo-A5)免疫试剂盒水通道蛋白4抗体TRPM4 瞬时受体电位离子通道蛋白4抗体(M亚家族)
镍粉 99.99% metals basis,200目小鼠载脂蛋白A1(Apo-A1)免疫试剂盒活化复制因子2抗体TRPM3 瞬时受体电位离子通道蛋白3抗体(M亚家族)
镍 AR,99.5%小鼠孕激素/孕酮(PROG)免疫试剂盒腺苷单活化蛋白激酶β1抗体TRPM2 瞬时受体电位离子通道蛋白/M亚家族抗体
水质镍标样 浓度范围:0.959-1.01(mg/L),分析标准品 小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)IgM抗体免疫试剂盒糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体TRPM1 瞬时受体电位离子通道蛋白1抗体(M亚家族)
纳米镍粉 比表面积10m2/g-60m2/g, 粒度20nm-100nm,99.9%小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)IgG抗体免疫试剂盒血管紧张素Ⅱ抗体TRPC6 瞬时受体电位离子通道蛋白6抗体
电解镍粉 99.5%,200目小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)免疫试剂盒血管紧张素Ⅱ受体1抗体TRPC3 色氨相关蛋白3抗体
还原镍粉 99.5%,5μm小鼠游离脂肪(FFA)免疫试剂盒血管生成素-1抗体TRP2 酪氨酶相关蛋白2抗体
雾化镍粉 99.8%,200目小鼠游离状腺素(FT4)免疫试剂盒膜粘连蛋白5抗体TRP1/gp75 酪氨酶相关蛋白1抗体
锑钠 98%小鼠游离睾酮(F-TESTO)免疫试剂盒重组膜粘连蛋白5抗体Troponin T/c 心肌特异性肌钙蛋白T抗体
锌 Anhydrous 小鼠幽门螺旋杆菌抗体(IgM)免疫试剂盒衔接蛋白α-Adaptin抗体Tropomyosin 原肌球蛋白1抗体
3.5水锌 粒度 1~2μm小鼠幽门螺旋杆菌抗体(IgG)免疫试剂盒凋亡蛋白活性因子-1抗体(C端)TROP2/TACD2 表面糖蛋白Trop2抗体(胰腺癌标志物蛋白)
3.5水锌 粒度 2~5μm小鼠印度猬因子(IHH)免疫试剂盒凋亡蛋白活性因子-1抗体(N端)Trop-2 原肌球蛋白抗体
3.5水锌 粒度 6~10μm,防腐小鼠吲哚2,3-双加氧酶1(IDO1)免疫试剂盒三腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体Trk C 酪氨激酶C抗体(神经生长因子受体的一种)
氟 99%小鼠音猬因子N端(Shh-N)免疫试剂盒载脂蛋白E抗体Trk B/NTRK2 酪氨激酶B抗体
氟化标准溶液 水质分析标准溶液,1mg/ml 溶液小鼠抑制素B(INH-B)免疫试剂盒淀粉样肽体蛋白抗体Trk B/NTRK2 酪氨激酶B抗体
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