中文名称:Caspase 6 活性检测试剂盒
英文名称:Caspase 6 Activity Assay Kit
产品规格:20次|100次
发货周期:1~3天
本试剂盒是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 6酶活性或纯化的caspase 6酶活性的试剂盒。本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品。
Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 6也称Mch-2,有时被写作caspase-6或caspase 6,初从人的Jurkat细胞中被发现。Caspase 6的体被granzyme B剪切后可以形成活化的caspase 6二聚体,而活化的caspase 6被发现可以诱导细胞凋亡。Caspase 6可以剪切PARP和keratin-18,也可以剪切细胞核核被膜上的关键组成蛋白Lamin A。Caspase家族中仅caspase 6可以剪切Lamin A。Caspase 6对于Lamin A的识别位点是VEID。本试剂盒利用了caspase 6对于VEID识别的特异性,设计了相应的caspase 6特异的显色底物Ac-VEID-pNA。
本Caspase 6活性检测试剂盒是基于caspase 6可以催化底物Ac-VEID-pNA(acetyl-Val-Glu-Ilel-Asp p-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 6的活性。pNA在405nm附近有强吸收。
试剂盒中提供了caspase 6催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase 6酶活性的标准品。
试剂盒组分:
裂解液——————8ml
检测缓冲液——————8ml
Ac-VEID-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
储存条件:-20℃。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
过氧化酰 75%, remainder water猪Na+/K+-ATP酶(Na/K ATPase)免疫试剂盒早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体TWIST protein TWIST蛋白抗体
过氧化氢叔丁 70% in H2O猪L-脱氢酶(L-LDH)免疫试剂盒化蛋白激酶AKT1抗体TWA1/C20orf11 20号染色体开放阅读框11抗体
过氧化叔丁酯 98%猪E选择素(E-Selectin/CD62E)免疫试剂盒化蛋白激酶AKT1抗体TUSC5 抑癌因5抗体
1,1-双(叔丁过氧)环己烷 80 wt. %猪D-脱氢酶(D-LDH)免疫试剂盒ASH1L蛋白抗体TUSC3 列腺癌抑癌蛋白3抗体
2,5-二-2,5-双(过氧化叔丁)-3-己炔 试剂猪D二聚体(D2D)免疫试剂盒α2C-AR肾上腺素能受体抗体TUSC2 血小板源性生长因子A相关蛋白2抗体
乙异戊酯 AR,99%猪C肽(C-Peptide)免疫试剂盒中心体蛋白AZI1抗体TUSC1 肺癌抑癌蛋白1抗体
过氧化十二酰 98%猪C反应蛋白(CRP)免疫试剂盒α蛋白激酶3抗体(心肌)Tumstatin/COL4A3 肿瘤抑素抗体
过硫钠 99.99% metals basis猪c-fos 免疫试剂盒表皮型脂氧合酶3抗体(鱼鳞病相关蛋白)TULP2/CT65/Cancer testis antigen 65 肿瘤/抗原65
四钠 AR,99%猪B淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫试剂盒锚蛋白重复域28抗体Tuftsin 促吞噬肽抗体
四钠 99.5%猪Bcl-2相关X蛋白(BAX)免疫试剂盒淋巴相关AF4样蛋白抗体Tubulin-beta 微管蛋白抗体(免疫组化用抗体)Tubulinβ
2,5-二-2,5-双-(叔丁过氧)己烷 93%猪Apelin(APLN)免疫试剂盒锚蛋白重复结构域蛋白12抗体Tubulin-Beta 微管蛋白抗体(免疫组化用抗体)Tubulin β
正丁 GR(剧品)猪5羟色(5-HT)免疫试剂盒锚蛋白重复结构域蛋白13A抗体Tubulin-alpha 微管蛋白α抗体 Tubulin α
异丁 99%(剧品)猪Ⅲ型胶原肽(PⅢNP)免疫试剂盒锚蛋白重复结构域蛋白9抗体tubulin Beta 微管蛋白β tubulin抗体 Tubulin β
异丁 Standard for GC, ≥99.5% (GC)猪Ⅲ型胶原氨末端肽(PⅢNP)免疫试剂盒锚蛋白重复及SAM结构域蛋白1A抗体Tubulin alpha 6/TUBA1C 微管相关蛋白α6抗体
聚烯酰 非离子型,分子量:200万-1400万猪Ⅲ型胶原氨端肽(PⅢNT)免疫试剂盒脂肪特定转录因子2抗体Tuberin/TSC2 马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体
Caspase 6 活性检测试剂盒软骨蛋白聚糖抗体Human LRMP ELISA KitⅠ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒--动物,人
5-氨基乙酰酸合酶1抗体Human LRDD ELISA Kit8异列腺素(8-iso-PG)ELISA试剂盒--动物,人
p53凋亡激蛋白1抗体Human LRPAP1 ELISA Kit皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒--动物,人
P53凋亡激蛋白2抗体Human LRR 1(Leucine-rich repeat protein 1) ELISA KitL-正缬氨酸
激活素受体2B抗体Human LRRC1 ELISA Kit小鼠神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒,
AIMP2抗体Human LPIN2 ELISA Kit小鼠α2纤溶酶抑制物(α2-PI)ELISA试剂盒,
乙酰胆碱酶抗体Human LPHN3 ELISA Kit小鼠甲状腺素抗体(TAb)ELISA试剂盒,
5-氨基乙酰酸合酶1抗体Human LPPR2 ELISA Kit小鼠促性腺释放(GnRH)ELISA试剂盒,