中文名称:Caspase 3 活性检测试剂盒
英文名称:Caspase 3 Activity Assay Kit
产品规格:20次|100次
发货周期:1~3天
本试剂盒是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 3酶活性或纯化的caspase 3酶活性的试剂盒。本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品。
Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3也称CPP32、Yama或apopain,有时被写作caspase-3或caspase 3,属于caspase家族的CED-3亚家族(CED-3 subfamily),是细胞凋亡过程中的一个关键酶。Caspase 3是哺乳动物细胞中研究多的一个caspase。Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9,并可以直接特异性剪切许多caspase底物,包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase),ICAD(Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease),gelsolin和fodrin等。这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。另外,caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用,包括染色质固缩(chromatin condensention),DNA段化(DNA fragmentation)等。同时caspase 3对细胞起泡(cell blebbing)也起到关键作用。
本Caspase 3 活性检测试剂盒是基于caspase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。pNA在405nm附近有强吸收。
试剂盒中提供了caspase 3催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase 3酶活性的标准品。
试剂盒组分:
裂解液——————8ml
检测缓冲液——————8ml
Ac-DEVD-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
储存条件:-20℃。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
二次膦酰 98%猪白介素4(IL-4)免疫试剂盒化活化复制因子2抗体Ube2G2/UBC7 泛素蛋白连接酶G2抗体
二 99%猪白介素3(IL-3)免疫试剂盒凋亡相关蛋白3抗体Ube2G1/UBC7 泛素蛋白连接酶G1抗体
二氧 98%猪白介素22(IL-22)免疫试剂盒自噬相关蛋白18抗体UBE2E3 泛素蛋白连接酶E3抗体
硝乙乙酯 96%猪白介素2(IL-2)免疫试剂盒自噬相关蛋白4A抗体UBE2E2 泛素蛋白连接酶2E2抗体
二乙氧膦 97%猪白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)免疫试剂盒载脂蛋白A4抗体UBE2D4 泛素蛋白连接酶D4抗体
二乙氧膦 90%猪白介素1β (IL-1β)免疫试剂盒12脂氧合酶抗体UBE2D3 泛素蛋白连接酶D3抗体
4-二酮 98%猪白介素1α(IL-1α)免疫试剂盒血管紧张素III抗体UBE2D2 泛素蛋白连接酶D2抗体
N--1-硫-2-硝乙烯 98%猪白介素18(IL-18)免疫试剂盒腺苷环化酶3抗体UBE2D1 泛素蛋白连接酶D1抗体
2-硝乙 90%猪白介素17(IL-17)免疫试剂盒血管动蛋白抗体UBE2C 泛素蛋白连接酶C抗体
二膦 98%猪白介素15(IL-15)免疫试剂盒腺病早期E1A蛋白抗体Ube2B 泛素激活酶2B抗体
1,3,5-三异 95%猪白介素13(IL-13)免疫试剂盒化活化复制因子2抗体UBE2A/UBE2B/RAD6 泛素结合酶E2蛋白A抗体
异三乙氧硅烷 95%猪白介素12(IL-12/P70)免疫试剂盒化活化复制因子2抗体Ube1L/UBE2 泛素激活酶2(泛素激活酶E1相关蛋白抗体)
6-三氟烟 97%猪白介素12(IL-12/P40)免疫试剂盒化失调症蛋白1抗体UBE1/E1 Ubiquitin Activating Enzyme 泛素激活酶E1抗体
二(2,4,6-酰)氧化膦 97%猪白介素10(IL-10)免疫试剂盒锚蛋白重复结构域蛋白17抗体UBCH6/UBE2E1 泛素蛋白连接酶E1抗体
2,4,6-三异磺酰 97%猪白介素1(IL-1)免疫试剂盒胞质乙脱氢酶1抗体UBC6e/UBE2J1 泛素结合酶E2J1抗体
Caspase 3 活性检测试剂盒锚定蛋白G抗体Human LRRC52 ELISA Kit小鼠末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA试剂盒,
肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体Human LRWD1(Leucine-rich repeat and WD repeat-containing protein 1) ELISA Kit小鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)ELISA试剂盒,
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