实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:Caspase 1 活性检测试剂盒
英文名称:Caspase 1 Activity Assay Kit
产品规格:20次|100次
发货周期:1~3天
本试剂盒是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 1酶活性或纯化的caspase 1酶活性的试剂盒。本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品。
试剂盒组分:
裂解液——————8ml
检测缓冲液——————8ml
Ac-YVAD-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也称interkeukin 1b conberting enzyme(ICE),有时被写作caspase-1或caspase 1,是caspase家族中唯一可以剪切IL-1b体蛋白或IL-18体产生相应成熟的细胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1体蛋白,产生20kD和10kD的片段,这两个片段可以形成异源二聚体(heterodimer),并进一步由两个异源二聚体形成四聚体。Caspase 1可以通过剪切其凋亡Bcl-XL来调节细胞凋亡,并通过其对一些细胞因子体的剪切来调控相关免疫反应。
本caspase 1活性检测试剂盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 1的活性。pNA在405nm附近有强吸收。
试剂盒中提供了caspase 1催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase 1酶活性的标准品。
储存条件:-20℃。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
聚乙二单 平均分子量1000猪低分子肝素(LMWH)免疫试剂盒化β抑制蛋白1抗体UGCGL2 二葡萄糖神经酰葡萄糖转移酶2抗体
蒽酮 AR猪弹性蛋白(ELN)免疫试剂盒化有丝分裂激酶A抗体UGCG/Ceramide glucosyltransferase 葡萄糖神经酰合成酶抗体
N-乙酰-D-半糖,水合 98%猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)免疫试剂盒化APS抗体UFD1L 泛素融合降解样蛋白1抗体
偶氮二二异酯 95%猪单核增多性李斯特菌素O((LLO)免疫试剂盒有丝分裂激酶A抗体UFC1 泛素结合酶UFC1抗体
偶氮二二叔丁酯 98%猪单核趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫试剂盒干扰素诱导蛋白AIM2抗体UEVLD/UEV3 泛素结合酶E2样蛋白抗体
4,4-二溴联 98%猪催素(PRL)免疫试剂盒水通道蛋白-2抗体UCP-3 线粒体脱偶连蛋白3抗体
3'-羟乙酮 98%猪催产素(OT)免疫试剂盒肿瘤抑制因ABI2/精氨酪氨蛋白激酶结合蛋白抗体UCP-2 线粒体脱偶连蛋白2抗体
硫新霉素 USP,680 I.U./mg猪促性腺激素抑制激素(GnIH)免疫试剂盒ADP核糖化因子样11抗体UCP-1 线粒体脱偶连蛋白1抗体
土霉素 97%猪促生长激素释放激素(GHRH)免疫试剂盒ARM重复X连锁蛋白ARMCX3抗体UCN2/Urotensin II 尾加压素2抗体
异酯 99%(剧品)猪促肾上腺皮质激素(ACTH)免疫试剂盒ARM重复X连锁蛋白ARMCX1抗体UCHL5IP 泛素羧末端水解酶5互相作用蛋白1抗体
邻硝 99%猪促卵泡素(FSH)免疫试剂盒ARM重复X连锁蛋白ARMCX2抗体UCHL1/PGP9.5 神经胞浆蛋白9.5抗体(蛋白因产物9.5)
对硝 99%猪促状腺素释放激素(TRH)免疫试剂盒自噬相关蛋白10抗体UBTD1 泛素结构域蛋白1抗体
间硝 CP猪促状腺素(TSH)免疫试剂盒酰辅酶A结合结构域蛋白6抗体UBR7/C14orf130 14号染色体开放阅读框130抗体
间硝 分析标准品猪雌激素(E)免疫试剂盒氨酰化酶1抗体UBR2 泛素蛋白连接酶E3α2抗体
间硝 standard for GC, ≥99.5% (GC)猪雌二受体(ER)免疫试剂盒脂肪甘油三酯脂酶抗体UBOX5/RNF37 泛素结合酶7相互作用蛋白5抗体
Caspase 1 活性检测试剂盒脂联素受体2抗体Human LSM8 ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA试剂盒,
ANGEL1蛋白抗体Human LSP1 ELISA Kit抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒--动物,人
ANGEL2蛋白抗体Human LSR ELISA Kit胆酸(CA)ELISA试剂盒--动物,人
ANKLE2蛋白抗体Human LTBP1(Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1) ELISA Kit促黄体(LH)ELISA试剂盒--动物,人
特异性锚样蛋白1抗体Human LUC7L ELISA KitL-丝氨酸
锚蛋白重复结构域蛋白13B抗体Human LUC7L2 ELISA Kit蘑菇假单胞价格
锚蛋白重复结构域蛋白20A1抗体Human LY6D ELISA Kit小鼠环孢素A(CsA)ELISA试剂盒,
锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体Human LUZP1 ELISA Kit小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒,