中文名称:一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)
英文名称:One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit
产品规格:20次|50次
发货周期:1~3天
本试剂盒提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织,只要经过一步染色反应,洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现红色荧光的凋亡细胞。本试剂盒足够检测20个样品。
试剂盒组分:
TdT酶—————————40μl
荧光标记液——————960μl
TdT酶稀释液(选用)———00μl
细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl
Transferase,TdT)的催化下加上红色荧光探针Cy3(Cyanine 3)标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,好同时检测多个凋亡指标。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
钛异酯 98%猪骨形成蛋白2(BMP-2)免疫试剂盒AICAR酰转移酶抗体Uteroglobin 珠蛋白抗体
钛四乙酯 33-35% TiO2 猪骨特异性碱性酶B(ALP-B)免疫试剂盒化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体USP9X 泛素特异性蛋白酶9X抗体
硅藻土 CP猪骨钙素/骨谷氨蛋白(OT/BGP)免疫试剂盒ATP5E蛋白抗体USP3 去泛素化酶3抗体
3-巯 98%猪骨成型蛋白7(BMP7)免疫试剂盒ATP5G2蛋白抗体USP28 泛素特异性蛋白酶28抗体
3-巯 99%,用于生化分析猪谷氨酰转氨酶 免疫试剂盒ATP6V0D2蛋白抗体USP10 去泛素酶10抗体
3-巯酯 98%猪谷氨酰合成酶(GS)免疫试剂盒ATP6V1B2蛋白抗体USP1 泛素特异性蛋白酶1抗体
2,4-二 99%猪睾酮(T)免疫试剂盒ATPIF1蛋白抗体USF-1 等上游激因子1抗体
2,3-二 98%猪高铁血红蛋白(MHB)免疫试剂盒Attractin蛋白抗体UROD 尿卟啉原脱羧酶抗体
三异 90%猪高尔蛋白73(GP⁻⁷3)免疫试剂盒化有丝分裂激酶B抗体Urocortin 3 尿皮质素UCN3抗体
Standard for GC,≥99.9% (GC) 猪肝炎病的受体1/肾损伤分子1/KIM1(HAVCR1)免疫试剂盒肌动蛋白相关蛋白M1抗体Urocortin 尿皮质素抗体
AR, ≥99.5%猪肝生长因子(HGF)免疫试剂盒ALKB蛋白抗体Urocortin 尿皮质素抗体
CP, ≥99.0%猪甘油-3-脱氢酶(GAPDH)免疫试剂盒乙酰辅酶A酰转移酶1抗体Uricase 尿酶
ACS, ≥99.0%猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2δ(CAMK2D)免疫试剂盒化β-肌动蛋白抗体URG4 (C terminal) 上调因4抗体(C端)
中标样 分析标准品猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ(CAMK2G/CAMKG)免疫试剂盒化肾上腺素能受体β2/β2-AR 抗体URG4 上调因4抗体(N端)
水质标样 浓度范围:0.9,2.01(mg/L),分析标准品 猪钙/钙调素依赖性蛋白激酶2β(CAMK2B/CAM2/CAMKB)免疫试剂盒化肾上腺素能受体β2/β2-AR抗体UQCRFS1 质子梯度调节蛋白1抗体
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)三磷酸腺苷结合盒转运蛋白2抗体Human LY96 ELISA Kit小鼠低密度脂蛋白复合物(LDL-IC)ELISA试剂盒,
载脂蛋白B抗体Human LYPLA1 ELISA Kit小鼠脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒,
花生四烯酸15脂氧合酶2抗体Human LYPLAL1 ELISA Kit肝脂酶(HL)ELISA试剂盒--动物,人
载脂蛋白C4抗体Human LYRM7 ELISA Kit抗单核抗体(AMA)ELISA试剂盒--动物,人
低密度脂蛋白受体衔接蛋白抗体Human LY6K ELISA Kit糖皮质受体β(GR-β)ELISA试剂盒--动物,人
原始广泛存在蛋白1抗体Human LYAR ELISA KitL-色氨酸甲酯盐酸盐
锚蛋白重复结构域蛋白37抗体Human LY96 ELISA Kit小鼠趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒,
α1,4-半乳糖基转移酶1Human LYN ELISA Kit小鼠α羟基丁酸脱氢酶(αHBDH)ELISA试剂盒,