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中文名称:TUNEL检测阳性对照制备试剂盒
英文名称:Positive control preparation kit for TUNEL detection
产品规格:10次
发货周期:1~3天
本试剂盒可以用于TUNEL检测阳性对照的制备,制备后的阳性对照可以用于一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(YT135)的荧光,也可以用于显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(YT137)的显色检测。DNase I可以剪切基因组DNA,使基因组DNA产生片段化(fragmentation)。基因组被片段化的细胞在用TUNEL法检查时会呈阳性染色。本试剂盒足够制备10个阳性对照。
试剂盒组份:
DNase I—————————10μl
Reaction Buffer(10X)——200μl
注意事项:需自备用于TUNEL检测的组织切片、或培养细胞的片子。需自备TUNEL检测试剂盒。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
吡 98%猪角化生长因子(KGF)免疫试剂盒芳香烃受体抗体VDCC-L alpha/CCHL1A1 L-型电压依赖型钙通道α抗体
2,3,5-吡 99%猪降钙素原(PCT)免疫试剂盒吸引素抗体VDAC3 线粒体外膜孔蛋白3抗体(电压依赖阴离子通道蛋白3)
2,3,5-吡 ≥99%, FCC, Kosher, FG 猪降钙素因相关肽(CGRP)免疫试剂盒腺苷三结合盒转运体A1抗体VDAC 等电压依赖性阴离子通道抗体
异戊乙酯 99%猪碱性成纤维生长因子(bFGF)免疫试剂盒蛋白激酶B2VCP 含缬酪肽蛋白抗体
异戊乙酯 ≥99%, FCC, Kosher, FG猪状腺素(T4)免疫试剂盒血管生成素2抗体VCAM-1/CD106/L1CAM 血管内皮粘附分子抗体
(±)-2--1-丁 98%猪低密度脂蛋白(VLDL)免疫试剂盒芳香化酶/色素P450/雌激素合成酶抗体VCAM-1 血管内皮粘附分子抗体
3,4-二氧 99%猪激素敏感性脂肪酶(HSL)免疫试剂盒腺苷A2A受体抗体VAV3 鸟嘌呤核苷交换因子VAV3抗体
2',6'二-3'-氟乙酮 97%猪激动异构酶/分裂素MB(CKMB)免疫试剂盒蛋白激酶A锚定蛋白95抗体VAV2 癌因VAV2抗体
2,4-二-3-硝-5-氟 97%猪质衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)免疫试剂盒顶膜钠依赖性胆盐转运体蛋白抗体VAV1 鸟苷转换因子VAV1抗体
4-氟乙酮 98%猪质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)免疫试剂盒去整合素样金属蛋白酶8抗体VAT1L/KIAA1576 突触小泡膜蛋白同源样蛋白1抗体
对氟 98%猪质金属蛋白酶9(MMP-9)免疫试剂盒芳香乙酰脱乙酰酶样蛋白3抗体VAT 囊泡乙酰胆碱通道抗体
4'-乙酮 99%猪质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)免疫试剂盒ACN9蛋白抗体VASP 血管扩张激蛋白抗体
6-氧-2-乙酰萘 98%猪肌激酶同工酶MB(CK-MB)免疫试剂盒双链RNA腺苷脱氨酶抗体(N端)VASH1 血管抑制蛋白1抗体
五化 CP,95.0%猪肌激酶(CK)免疫试剂盒腺苷单活化蛋白激酶α2抗体VAPB 囊泡相关膜蛋白相关的蛋白B
五化 AR,98.0猪肌红蛋白(MB)免疫试剂盒腺苷激酶抗体VAPA 囊泡相关膜蛋白相关蛋白A抗体
TUNEL检测阳性对照制备试剂盒乙脱氢酶1抗体Human MAGIX ELISA Kit红生成素(EPO)ELISA试剂盒--动物,人
δ氨基乙酰酸脱水酶抗体Human MAGEB18 ELISA Kit小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)ELISA试剂盒,
肌侧索硬化症相关蛋白4抗体Human MAGEA8 ELISA Kit小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒,
α2巨球蛋白(α-2M)抗体Human MAGOH ELISA Kit小鼠叠氮胸苷(AZT)ELISA试剂盒,
ACCSL蛋白抗体Human MAGT1 ELISA Kit小鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒,
甲胎蛋白抗体Human MAGEB18 ELISA Kit腮腺炎病IgG ELISA试剂盒--动物,人
β淀粉样体蛋白结合蛋白3抗体Human LZTS2 ELISA Kit(HYD)ELISA试剂盒--动物,人
星形肌动蛋白抗体Human MAGEB4 ELISA Kit小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。