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中文名称:细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1法)
英文名称:WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
产品规格:100次|500次
英文名称:WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
产品规格:100次|500次
发货周期:1~3天
本试剂盒是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-1是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考下图)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。
WST-1是MTT的一种升替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-1和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。其次,WST-1产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-1比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳定。另外,WST-1和MTT、XTT等相比,线性范围更宽,灵敏度更高(参考下图)。
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。
本试剂盒检测非常便捷。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。
酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。WST-1对细胞无明显毒性。加入WST-1显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测时间更加灵活,便于找到佳测定时间。
注意事项:
由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
乙二 >99%(GC)猪胃泌调节素(OXM)免疫试剂盒ADCK1蛋白抗体Wnt8A 信号通路WNT8A抗体
三乙烯四 AR,70%猪伪狂犬病(PRV)抗体(IgG)免疫试剂盒酰辅酶A结合结构域蛋白4抗体WNT7B Wnt蛋白家族7B抗体
四乙烯五 95%猪维生素D(VD)免疫试剂盒α/β水解酶4抗体WNT7A 原癌因wnt7a蛋白抗体
四乙烯五 CP,90.0% 猪褪黑素(MT)免疫试剂盒ADCK2蛋白抗体Wnt6 信号通路Wnt6抗体
邻酚 99%猪透明质(HA)免疫试剂盒乙脱氢酶16家庭A1抗体WNT5A 信号通路Wnt5a抗体
对酚 98%猪铁蛋白(FE)免疫试剂盒粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体WNT4 信号通路Wnt4抗体
对酚 99%猪糖化血红蛋白A1c(A1c)免疫试剂盒乙脱氢酶1抗体Wnt3a 信号通路Wnt3a抗体
对酚 Standard for GC,≥99.7% (GC) 猪胎球蛋白A 免疫试剂盒δ氨乙酰脱水酶抗体WNT2B 信号通路Wnt2B抗体
对酚标准溶液1059mg/L,溶剂:猪胎盘生长因子(PGF)免疫试剂盒肌侧索硬化症相关蛋白4抗体WNT2 信号通路Wnt2抗体
对酚 分析标准品猪髓脂碱性蛋白(MBP)免疫试剂盒α2巨球蛋白(α-2M)抗体Wnt16 信号通路Wnt16抗体
利血平 ≥99.0% (HPLC)猪髓过氧化物酶(MPO)免疫试剂盒ACCSL蛋白抗体WNT12/WNT10B 信号通路WNT10B抗体
硫长春碱 分析标准品,≥97%(HPLC)猪水通道蛋白4(AQP-4)免疫试剂盒胎蛋白抗体Wnt11 信号通路Wnt11抗体
文多灵 分析标准品,≥98%猪水通道蛋白1(AQP-1)免疫试剂盒β淀粉样体蛋白结合蛋白3抗体WNT10A 信号通路WNT10A抗体
文多灵 ≥98.0% (HPLC)猪双氢睾酮(DHT)免疫试剂盒星形肌动蛋白抗体Wnt1 信号通路Wnt1抗体
硫长春新碱 98%猪输血传播病/辛型肝炎病抗体(IgG)免疫试剂盒系统性红斑狼疮相关蛋白TREX1抗体WNK4 WNK4抗体
细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1法)腺苷A1A受体抗体Human MAP4K5 ELISA Kit小鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒,
芳基硫酸酯酶B抗体Human MAPK4 ELISA Kit小鼠新生甲状腺素(NN-T4)ELISA试剂盒,
γ氨基丁酸转氨酶抗体Human MAPK6 ELISA Kit透明质酸(HA)ELISA试剂盒--动物,人
共济失调蛋白2结合蛋白1抗体Human MAPK7 ELISA Kit军团抗体IgG(LP Ab-IgG)ELISA试剂盒--动物,人
肿瘤坏死因子α转换酶Human MAPKBP1 ELISA Kit血栓素B2(TXB2)ELISA试剂盒--动物,人
芳香烃受体核转录蛋白2抗体Human Marcks ELISA Kit皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA试剂盒--动物,人
AlkB同源蛋白8抗体Human MAP4K4 ELISA Kit雄烯二酮(ASD)ELISA试剂盒--动物,人
ABI基因家族成员3结合蛋白抗体Human MAPRE2 ELISA Kit小鼠白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。