实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT法)
英文名称:MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
产品规格:500次
英文名称:MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
产品规格:500次
发货周期:1~3天
本试剂盒被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结 晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下,可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附 近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。
本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方,无需去除原有的培养液,可 以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。本试剂盒本底低,灵敏度高,线性范围宽,使用方便。
试剂盒组份:
MTT——————25mg
MTT溶剂——————5ml
Formazan溶解液——55ml
储存条件:4℃,有效期一年。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
反式 GR,99.0%(剧品)猪血浆激肽释放酶(KLKB1)免疫试剂盒血管生成素相关蛋白6抗体YY1AP1/HCCA2 肝癌相关蛋白2抗体(转录因子YY1结合蛋白1抗体)
正丁 >99.5%(GC)猪血红蛋白(Hb)免疫试剂盒Muellerian缪勒管激素抑制因子抗体YY1 核转录调节因子YY1抗体
正丁 ACS, ≥99.4%猪血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)免疫试剂盒酪氨蛋白激酶受体A8抗体YES1 原癌因酪氨蛋白激酶Yes1抗体
乙丁酯 for HPLC, ≥99.7% (GC)猪血管舒缓激肽(BK)免疫试剂盒脂肪酰辅酶A家族成员1抗体YBX-1/YB1 核敏感元件结合蛋白1
乙乙酯 AR,99%猪血管生成素2(ANG-2)免疫试剂盒芳香烃受体核转录蛋白样2抗体YB1 y-盒结合蛋白1抗体
乙乙酯 for HPLC, >99.0%(GC)猪血管生成素1(ANG-1)免疫试剂盒化芳香N-乙酰化转移酶抗体YAP1 原癌因Yes相关蛋白1抗体
溶液 AR,含10-15% 稳定剂猪血管内皮粘附分子1(VCAM-1)免疫试剂盒肌动蛋白结合蛋白1抗体XTP4 乙型肝炎病X蛋白反转录蛋白4抗体
Standard for GC,>99.9%猪血管内皮生长因子(VEGF)免疫试剂盒粘附分子IgG样结构域蛋白2抗体XRCC4 X射线修复交叉互补蛋白4抗体
AR,99.5%猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)免疫试剂盒肌动蛋白结合蛋白DOC6抗体XRCC3 X射线修复交叉互补蛋白3抗体
CP,99.5%猪血管紧张素转化酶2(ACE2)免疫试剂盒AFG3样蛋白2/脊髓小脑共济失调蛋白28抗体XRCC1 X射线修复交叉互补蛋白抗体
AR,无水猪血管紧张素转化酶(ACE)免疫试剂盒激活素受体相互作用蛋白1抗体XPC DNA补充修复XPC蛋白抗体
for HPLC, ≥99.9%猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫试剂盒固酮类还原酶家族7成员A2抗体XPB/ERCC3 DNA损伤修复酶ERCC3蛋白抗体
农残, ≥99.9%猪血管活性肠肽(VIP)免疫试剂盒蛋白激酶AKT1,2,3抗体XKR1 膜转运蛋白XK抗体
≥99.9%(GC)猪旋毛虫IgG抗体免疫试剂盒帕金森病相关蛋白ATP13A2抗体XIAP/BIRC4 X-连锁凋亡蛋白/性连锁凋亡抑制蛋白抗体
ACS猪胸腺肽β4(Thymosin β4)免疫试剂盒肌侧索硬化蛋白2抗体XDH/Xanthine Oxidase 氧化酶抗体
细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT法)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体Human TNFα(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit小鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒,
磷酸化间变型瘤激酶抗体Human IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit小鼠白介素27(IL-27)ELISA试剂盒,
磷酸化扩张性共济失调症突变蛋白抗体Human MBD3(Methyl-CpG-binding domain protein 3) ELISA Kit兔子皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒,
磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶抗体Human MBD2 ELISA Kit促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒--动物,人
磷酸化ATR抗体Human DNASE2(Deoxyribonuclease-2-alpha) ELISA Kit小鼠催产素(OT)ELISA试剂盒,
核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1抗体Human LCMT1(Leucine carboxyl methyltransferase 1) ELISA Kit小鼠抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒,
天门冬酰连接糖基化11抗体Human Anti-LAMP2(Anti-lysosomal Associated Membrane Protein 2 Antibody) ELISA Kit小鼠中性粒弹性蛋白酶(NE)ELISA试剂盒,
衰老相关蛋白ASF1A抗体Human anti-2019-nCoV(N) IgG ELISA Kit小鼠抗凝血酶受体(ATR)ELISA试剂盒,