服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 猪瘟病毒/猪蓝耳病病毒通用型(CSFV/PRRSV-U)检测试剂盒(双重荧光-PCR法)规格 | GOY-01P64561 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
香茅弯孢溶质载体家族蛋白21成员1C1抗体Anti-POMT2 Antibody巨噬炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA试剂盒
空肠弯曲杆菌电压门控钠通道SCN3B蛋白抗体Anti-POMC Antibody巨噬炎性蛋白1α(MIP1α)ELISA试剂盒
黄杆菌属胞吐分泌蛋白Sec6抗体Anti-PON1 Antibody巨噬来源趋化因子(MDC)ELISA试剂盒
栖热菌属神经突触素13抗体Anti-PON1 Antibody巨噬集落激因子(MCSF)ELISA试剂盒
蔷薇痂圆孢霉多配体聚糖结合蛋白2抗体Anti-PON1 Antibody巨噬表达基因1蛋白(MPG1)ELISA试剂盒
毛霉属结合珠蛋白家族3A1抗体Anti-PON1 Antibody巨肌酸激酶(MCK)ELISA试剂盒
皱褶莫氏黑粉菌抑癌基因SSDP2抗体Anti-PON1 Antibody静止素Q6硫基氧化酶1(QSOX1)ELISA试剂盒
浅黄色假单胞菌磷酸化信号转导分子SMAD3抗体Anti-PON1 Antibody痉挛性截瘫蛋白11(SPG11)ELISA试剂盒
植物乳杆菌丝氨酸蛋白酶抑制剂B4抗体(鳞状癌抗原)Anti-PON2 Antibody痉挛蛋白(SPAST)ELISA试剂盒
燕麦嗜酸菌西瓜亚种*鞘磷脂合成酶2抗体Anti-POR Antibody景天庚酮糖激酶(SHPK)ELISA试剂盒
大果毛壳鲨烯环氧酶抗体Anti-POR Antibody特异性抗原2(SSFA2)ELISA试剂盒
Actinomonospora芳基磺基转移酶1抗体Anti-PON2 Antibody蛋白17(Sp17)ELISA试剂盒
芽胞杆菌肿瘤相关胰蛋白酶抑制剂1抗体Anti-POR Antibody精脒/精N1-乙酰基转移酶2(SAT2)ELISA试剂盒
杀结节链霉菌硫酸酯酶1抗体Anti-POSTN Antibody精脒/精N1-乙酰基转移酶1(SAT1)ELISA试剂盒
大肠埃希菌内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制蛋白抗体Anti-POT1 Antibody精氧化酶(SMOX)ELISA试剂盒
费氏中华根瘤菌沉默调节相关蛋白4抗体Anti-POR Antibody(PB0780)精合酶(SMS)ELISA试剂盒
P53诱导细胞凋亡抑制蛋白抗体微泡菌属小鼠支气管成纤维细胞提取物
丙型肝炎非结构蛋白5A反式激活蛋白9抗体金雀儿根瘤苍白杆菌小鼠肺大静脉内皮细胞提取物
环指蛋白107抗体青枯假单胞菌(不提供)小鼠气管和支气管上皮细胞提取物
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶NEK8抗体串珠镰孢(斜面)小鼠肺动脉成纤维细胞提取物
猪瘟病毒/猪蓝耳病病毒通用型(CSFV/PRRSV-U)检测试剂盒(双重荧光-PCR法)规格甲苯胺兰O;3-氨基⁻⁷-(二甲基氨基)-2-甲基吩噻嗪-5-翁氯化物;碱性蓝17;氯托洛宁;托洛氯铵
Toluidine blue O
其他 Basic Blue 17;C.I. 52040;Tolonium chloride; 3-Amino⁻⁷-dimethylamino-2-methylphenazathionium chloride
产品规格: FMP,84%
包装:5克/25克
CAS号:92-31-9
别:For microscopy
含量:≥84.0%
大吸收波长λmax:628~633 nm
吸光度试验(E1%,λmax,1cm cell H2O):≥1150
性状:深绿色或黑灰色粉末,有古铜色光泽。溶于水(3.82g/100ml),呈蓝紫色溶液,微溶于乙醇(0.57g/100ml)呈蓝色,微溶于。大吸收波长(水中) 640.4nm。半数致死量(大鼠,静脉)28.93mg/kg。
用途:生化研究。氧化还原指示剂;生物染色剂。组织化学中用于测定脱氧核糖核酸和核糖核酸;羊毛、丝的印染
保存:RT
CAS:6586-04-5RT
甲苯胺蓝
甲苯胺兰
Toluidine bule
产品规格: BS,84%
包装:5克/25克
CAS号:6586-04-5
别:BS
含量:≥84.0%
性状:深绿色或黑灰色粉末,有古铜色光泽。溶于水。商品为氯化锌复盐
用途:生化研究。甲苯胺蓝是常用的人工合成染料的一种,属于醌亚胺染料类,这类染料一般含有两个发色团,一个是胺基,一个是醌型苯环,来构成色原显色。染料除有发色团外,还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和力的原子团即助色。助色团能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色。可染细胞核使之呈蓝色。
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。