服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 鸭源性成分(Duck)检测试剂盒(荧光-PCR法)说明书 | GOY-01P64499 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
泡盛曲霉酪氨酸酶相关蛋白1抗体Anti-IL7R Antibody松弛肽(RLN)ELISA试剂盒
灰锈赤链霉菌推定NFκB激活蛋白20抗体Anti-ING1 Antibody松弛素/胰岛素样肽受体3(RXFP3)ELISA试剂盒
酿酒酵母Src激活和信号分子蛋白抗体Anti-INA Antibody松弛素/胰岛素样肽受体1(RXFP1)ELISA试剂盒
野别样希瓦氏菌肿瘤坏死因子受体相关蛋白6结合蛋白抗体Anti-INPP5D Antibody四旋蛋白9(TSPAN9)ELISA试剂盒
科贝特氏菌属B淋巴基因1抗体Anti-INHA(Inhibin α) Antibody四旋蛋白8(TSPAN8)ELISA试剂盒
红色红菇T活化连接蛋白抗体Anti-Inhibin alpha/INHA Antibody四旋蛋白7(TSPAN7)ELISA试剂盒
青紫链霉菌转录共激活因子TAZ抗体Anti-INPPL1 Antibody四旋蛋白6(TSPAN6)ELISA试剂盒
多主葡壳菌凝血酶(凝血因子II)轻链抗体Anti-Insig1 Antibody四旋蛋白5(TSPAN5)ELISA试剂盒
维氏红细菌凝血酶(凝血因子II)激活肽1抗体Anti-INSR Antibody四旋蛋白4(TSPAN4)ELISA试剂盒
灵芝(红芝, 赤芝)凝血酶(凝血因子II)激活肽2抗体Anti-INSR Antibody四旋蛋白30(TSPAN30)ELISA试剂盒
球孢白僵菌Tafazzin蛋白抗体Anti-Integrin alpha V/ITGAV Antibody四旋蛋白3(TSPAN3)ELISA试剂盒
圣保罗沙门氏菌TEC酪氨酸激酶蛋白抗体Anti-Integrin beta 4/ITGB4 Antibody四旋蛋白27(TSPAN27)ELISA试剂盒
盐反硝化枝芽孢杆菌钙转运蛋白1抗体Anti-Integrin beta 5/ITGB5 Antibody四旋蛋白2(TSPAN2)ELISA试剂盒
绿色粘帚霉金属蛋白酶组织抑制因子-2抗体Anti-IQGAP1 Antibody四旋蛋白1(TSPAN1)ELISA试剂盒
金黄色葡球菌肿瘤坏死因子配体超家族成员19抗体Anti-IQGAP1 Antibody四加半LIM域蛋白1(FHL1)ELISA试剂盒
高地芽孢杆菌肿瘤坏死因子配体超家族成员9抗体Anti-IQGAP2 Antibody死亡诱导终结因子1(DIDO1)ELISA试剂盒
SLU7蛋白抗体缓慢葡球菌小鼠神经小胶质细胞
丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶3B抗体食酸菌属小鼠肺泡巨噬细胞
丝氨酸/苏氨酸激酶25抗体噬琼胶海水菌小鼠小脑颗粒细胞
丝氨酸蛋白酶抑制剂A10抗体梭形芽孢杆菌属小鼠神经元细胞
鸭源性成分(Duck)检测试剂盒(荧光-PCR法)说明书交联葡聚糖凝胶G-150;交联右旋糖酐凝胶G-150
Sephadex G-150
其他 Cross-inked dextran gel G-150
产品规格: 进分
包装:25克/100克
产品规格: 进口原装
包装:100克
产品规格: 国产
包装:25克/100克
干颗粒直径:40~120um(细)
分子量分范围:A.肽及球形蛋白质:5000~400000;B. 葡聚糖(线性分子):1000~150000
床体积毫升/克干分子筛:20~30ml/g
得水值:15.0±1.5
溶胀少平衡时间(h):室温72h(20℃);沸水浴5h(90℃)
柱头压力(kpa)(2.5cm直径柱):0.88~3.53
PH:2~13
性状:白色珠粒,属亲水性凝胶。性稳定,不溶于水、弱酸和碱溶液,遇强酸能使糖苷键分解
用途:生化研究。用于凝胶过滤,肽类分离、脱盐,分子量测定
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。