服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 肺炎链球菌(SP)检测试剂盒(荧光-PCR法)说明书 | GOY-01P64427 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
mRNA结合蛋白抗体Anti-Connexin-46(GJA3) Antibody组氨酸脱羧酶(HDC)ELISA试剂盒
裂褶菌环指蛋白126抗体Anti-COPE Antibody组氨酸丰富糖蛋白(HRG)ELISA试剂盒
木拉克酵母属小鼠抗人红单克隆抗体Anti-COX8A Antibody组氨酸丰富钙结合蛋白(HRC)ELISA试剂盒
鸡痘病视黄酸受体应答蛋白2抗体Anti-COPS5 Antibody阻抑素2(PHB2)ELISA试剂盒
茶叶枯盘孢菌*抗Rap1A抗体Anti-COPS5 Antibody(PB0521)阻抑素(PHB)ELISA试剂盒
立枯丝核菌RAS癌基因相关蛋白RAB7抗体Anti-CPA1 Antibody足盂蛋白(PCX)ELISA试剂盒
环带青霉c-Myc应答蛋白抗体Anti-CP Antibody(PB0896)棕榈酰化膜蛋白6(MPP6)ELISA试剂盒
灰平链霉菌RAS癌基因相关蛋白RAB6B抗体Anti-CPAMD8 Antibody棕榈酰化膜蛋白5(MPP5)ELISA试剂盒
文昌小单孢菌Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗体Anti-CP Antibody(PB0897)棕榈酰化膜蛋白2(MPP2)ELISA试剂盒
产肠素大肠埃希氏菌结肠癌相关基因蛋白抗体(resistin-like β)Anti-CPB2 Antibody自噬相关16样蛋白1(ATG16L1)ELISA试剂盒
古巴光盖伞*磷酸化原癌基因c-Met相关酪氨酸激酶抗体Anti-CPT2 Antibody自噬/苄氯素1调节因子1(AMBRA1)ELISA试剂盒
酿酒酵母环指蛋白6抗体Anti-CPB2 Antibody自身免疫调节因子(AIRE)ELISA试剂盒
藤黄微球菌核糖核酸酶6抗体Anti-CPM Antibody滋养层特异性糖蛋白(TPBG)ELISA试剂盒
芽胞杆菌磷酸化Ras特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1Anti-CPT1B Antibody(PB0512)转运蛋白3(TNPO3)ELISA试剂盒
彩色豆马勃磷酸化周期检查控制蛋白质抗体Anti-CR1 Antibody转运蛋白2(TNPO2)ELISA试剂盒
死亡谷芽孢杆菌磷酸化周期检查控制蛋白质抗体Anti-CRB1 Antibody转运蛋白1(TNPO1)ELISA试剂盒
蜡状芽孢杆菌Bacillus│cereus Frankland and Frankland 质量规格:>98%(T),标准品
溶血不动杆菌Acinetobacter│heamolyticus 质量规格:>98%,BR
动性球菌Planococcus│sp. 质量规格:>98%,BR
肺炎链球菌(SP)检测试剂盒(荧光-PCR法)说明书肼黄;食用柠檬黄;酸性黄23;1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)-5-吡唑啉酮-3-羧酸三钠盐;食用色素黄色5号;他特秦
Tartrazine
其他 Tartar yellow;3-Carboxy-5-hydroxy-1-p-sulfophenyl-4-p-sulfophenylazopyrazole trisodium salt;4-(p-Sulfobenzeneazo)-1-p-sulfophenyl-5-hydroxypyrazole-3-carboxylic acid trisodium salt;C.I.19140
产品规格: BS,85%
包装:5克/25克/100克/500克
CAS号:1934-21-0
别:BS
含量:≥85.0%
重金属:≤40ppm
砷:≤3ppm
铅:≤10ppm
性状:橙黄色粉末。21℃时的溶解度为:水11.8%,10%的乙醇9%,50%的乙醇3%,溶于甘油,丙二醇,不溶于油脂,属偶氮型酸性染料,耐热性,耐酸性,耐光性,耐盐性均好,在柠檬酸及酒石酸等溶液中很安定。耐氧化性较差,遇碱稍变红,还原时褪色。熔点:300℃。
用途:生化研究。生物染色用。沉淀滴定的吸附指 示剂,如用于银盐滴定氯和碘离 子,也用作氧化还原指示剂。制造照相镜头黄色滤片。
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。