操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 小反刍兽疫病毒(PPRV)检测试剂盒(荧光-PCR法)规格 | GOY-01P64341 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
异常汉逊酵母异常变种一氧化氮合成酶-3(内皮型)抗体Human CNTF(Ciliary neurotrophic factor) ELISA Kit胶质系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒
白金针14孤菲肽受体/痛敏肽受体抗体Human FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit胶原凝集素(Collectin)ELISA试剂盒
异常汉逊酵母钠转运体蛋白抗体Human FLT3(Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3) ELISA Kit胶原酶II(Collagenase II)ELISA试剂盒
相思根瘤菌P物质受体抗体Human IFNA1(Interferon alpha-1/13) ELISA Kit胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒
苏云金芽胞杆菌神经激肽B受体抗体Human 5-NT(5-Nucleotidase) ELISA Kit胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA试剂盒
鸡氏菌肿瘤转移抑制基因抗体Human AAA(Anti-Albumin Antibody) ELISA Kit胶原吡啶交联(PYD)ELISA试剂盒
污黑腐皮壳肿瘤抑制基因抗体Human ABCC5(ATP Binding Cassette Transporter C5) ELISA Kit降脂素(Adipsin)ELISA试剂盒
棉子糖乳球菌肿瘤抑制基因抗体Human ABCG1(ATP Binding Cassette Transporter G1) ELISA Kit降解加速因子(DAF)ELISA试剂盒
产酸克雷伯氏菌孤菲肽/痛敏肽抗体Human AAHA(Anti-Apolipoprotein Antibody) ELISA Kit降钙素原(PCT)ELISA试剂盒
紫色红曲轴索过度生长抑制因子受体/Nogo受体抗体Human ACA-IgG(Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒
玉米黑粉菌神经元引导蛋白3抗体Human ACAT2(Acetyl Coenzyme A Acetyltransferase 2, cytosolic) ELISA Kit降钙素(CT)ELISA试剂盒
酿酒酵母性受体NK-p46抗体Human ACHAP(Acetylcholinesterase Associated Protein) ELISA Kit碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒
镰刀菌属神经组织特异性F肌动蛋白结合蛋白2抗体Human ACC(Acetyl-CoA Carboxylase) ELISA Kit碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌NYS48蛋白抗体Human IFNA1(Interferon alpha-1/13) ELISA Kit碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白(BATF)ELISA试剂盒
杏鲍菇肌痉挛性癫痫病相关EPM2蛋白抗体Human FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit碱性成纤维生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒
灵芝非霍奇金淋巴瘤重复蛋白2抗体Human ANXA5(Annexin A5) ELISA Kit碱性成纤维生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒
地衣芽孢杆菌Bacillus│licheniformis 质量规格:>90%,罗氏分包黄芪皂苷II
产紫青霉Penicillium│purpurogenum 质量规格:>98%,BR黄芪皂苷I
秦氏蜜环菌Armillaria│qinii H.C. Wang & J. Zhao 质量规格:30 units/mg黄芪苷
小反刍兽疫病毒(PPRV)检测试剂盒(荧光-PCR法)规格利发霉素;甲哌利福霉素;力复平;利米定;3-[[(4-甲基-1-哌嗪基)亚氨基]甲基]-利福霉素;利福霉素SV;甲哌力复霉素;3-(4-甲基-1-哌嗪亚胺甲基)利福霉素;利福定
Rifampicin
其他 3-(4-Methylpiperazinyliminomethyl)rifamycin SV;Rifamycin AMP
产品规格: USP,99%
包装:25克/100克/500克/1克
CAS号:13292-46-1
别:USP
含量:≥99.0%
PH:4.5~6.5
干燥失重:≤2.0%
性状:红棕色或棕红色结晶粉末。易溶于和二甲基亚砜,溶于乙酸乙酯、甲醇和四氢呋喃,、丙醇。干燥粉末可稳定5年以上,微溶于水,其水溶液在室温10h失效,但加入还原剂(如抗环血酸)可减少分解,在二甲亚砜中稳定
用途:生化研究。对结核杆菌和其他分枝杆菌,革兰氏阳性和革兰氏阴性菌均有很强的杀菌作用。抑制DNA的重组和蛋白质插进成熟的病毒颗粒。靠结合RNA聚合酶的β-亚单元抑制RNA合成的起始。
保存:2~8℃