服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 猫疱疹病毒(FHV)检测试剂盒(荧光-PCR法)规格 | GOY-01P64333 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
豇豆慢生根瘤菌高分子量神经丝蛋白抗体Human FBLN2(Fibulin-2) ELISA Kit人抗菌肽(Att)ELISA试剂盒
柠条根瘤菌核因子/k基因结合核因子抗体Human FGG(Fibrinogen gamma chain) ELISA Kit人抗酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌低分子量神经丝蛋白抗体Human VIP(VIP peptides) ELISA Kit人抗酸性磷酸酶(TRACP)ELISA试剂盒
蜡样芽胞杆菌 (蜡状芽胞杆菌)中分子量神经丝蛋白抗体Human TNFRSF10A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A) ELISA Kit人抗抗体(AsAb)ELISA试剂盒
芽孢杆菌生长抑制蛋白NDN抗体Human FGG(Fibrinogen gamma chain) ELISA Kit人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA试剂盒
链霉菌神经生长因子β抗体Human BCAM(Basal cell adhesion molecule) ELISA Kit人抗角蛋白抗体(AKA)ELISA试剂盒
广食黄杆菌鼻咽癌相关基因6抗体Human VIP(VIP peptides) ELISA Kit人抗胶原蛋白抗体(CLA)ELISA试剂盒
糖化酵母钠氢通道蛋白抗体Human CTGF(Connective tissue growth factor) ELISA Kit人抗甲状腺微粒体抗体(ATMA/TMAB)ELISA试剂盒
青贮窖芽孢杆菌钠氯离子转运蛋白抗体Human βEP(Beta-endorphin) ELISA Kit人抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌神经元特异性烯化酶/γ 烯化酶抗体Human LRP2(Low-density lipoprotein receptor-related protein 2) ELISA Kit人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)ELISA试剂盒
酿酒酵母神经营养因子-3蛋白抗体Human BMPR1A(Bone morphogenetic protein receptor type-1A) ELISA Kit人抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌核受体相关因子-1抗体Human CD86(T-lymphocyte activation antigen CD86) ELISA Kit人抗肌联蛋白抗体(TTN)ELISA试剂盒
酿酒酵母核因子2相关因子2抗体Human CXCR1(C-X-C chemokine receptor type 1) ELISA Kit人抗肌动蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒
顶青霉神经纤毛蛋白1抗体Human C3(Complement C3) ELISA Kit人抗黄体生成素抗体(Anti LH Ab)ELISA试剂盒
扣囊复膜孢酵母神经生长因子4/5抗体Human LPA(Lipoprotein a) ELISA Kit人抗环胍氨酸肽抗体(CCP)ELISA试剂盒
黑紫红菇巢蛋白NID2抗体Human CP(Ceruloplasmin) ELISA Kit人抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)ELISA试剂盒
桔绿木霉Trichoderma citrinoviride Bissett 质量规格:>98%,BR咖啡酸
平田头菇Agrocybe│pediades (Fr.) Fayod 质量规格:BR,>7U/MG, powder氧化苦参碱
白马勃Calvatia│candida (Rostk.) Hollós 质量规格:酶活力≥30000u/g苦参碱
猫疱疹病毒(FHV)检测试剂盒(荧光-PCR法)规格链丝菌蛋白酶;链霉菌蛋白酶;蛋白酶E
Pronase E
其他 Actinase E
产品规格: BR,4000u/mg
包装: 250毫克
CAS号:9036-06-0
别:BR
来源:From streptomyces griseus
活力(Casein,pH7.4,40℃):≥4000u/mg
pH范围:5.0~9.0
分子量:15000~27000
性状:微褐色粉末。为从灰色链霉菌(Streptomyces griseus)中分离出的一种非特异蛋白水解酶(Protease)的有名称。分子量一般为20000。易溶于盐水和稀盐溶液,适pH值7.8~8.0
用途:生化研究。裂开蛋白质的肽键,有强的蛋白水解作用,能水解纤维蛋白、黏蛋白。
保存:-20℃
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。