
服务流程:接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 牛巴氏杆菌(PB)检测试剂盒(荧光-PCR法)规格 | GOY-01P64321 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
宇佐美曲霉染色体及有丝分裂蛋白MIS12抗体Human GDF5(Growth/differentiation factor 5) ELISA Kit淋巴素β(LTB)ELISA试剂盒
有柄树舌灵芝(白芝)单羧酸转运蛋白-1抗体Human HSPG2(Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein) ELISA Kit淋巴素α(LTA)ELISA试剂盒
异常汉逊酵母线粒体核糖体蛋白L11抗体Human TEP1(omerase protein component 1) ELISA Kit亮脑啡肽(LEK)ELISA试剂盒
葡座腔菌促血管平滑肌分化因子抗体Human CSTA(Cystatin-A) ELISA Kit亮氨酰-半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌跨膜结构域4亚家族成员2抗体Human HBA1(Hemoglobin subunit alpha) ELISA Kit亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA试剂盒
鸟乳杆菌不解棉子糖亚种磷酸化致癌基因C-Myc抗体Human SULF2(Extracellular sulfatase Sulf-2) ELISA Kit亮氨酸富含重复丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(LRRK2)ELISA试剂盒
胶红酵母肌收缩蛋白MYOT抗体Human STEAP1(Metalloreductase STEAP1) ELISA Kit亮氨酸氨基肽酶3(LAP3)ELISA试剂盒
简单芽孢杆菌磷酸化丝裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗体Human HIF1AN(Hypoxia-inducible factor 1-alpha inhibitor) ELISA Kit链激酶(SK)ELISA试剂盒
pQE70环指蛋白59抗体Human NAA20(N-alpha-acetyltransferase 20) ELISA Kit连蛋白(zonulin)ELISA试剂盒
橙色单胞菌磷酸化丝裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗体Human DPP10(Inactive dipeptidyl peptidase 10) ELISA Kit粒特异性抗核抗体(GS-ANA)ELISA试剂盒
大肠埃希菌甲羟戊酸激酶抗体Human SOX9(Transcription factor SOX-9) ELISA Kit粒趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒
粪肠球菌甲羟戊酸脱羧酶抗体Human AMD1(S-adenosylmethionine decarboxylase proenzyme) ELISA Kit粒巨噬集落激因子抗体(GM-CSF Ab)ELISA试剂盒
路德类酵母胞浆苹果酸酶1抗体Human SLC25A5(ADP/ATP translocase 2) ELISA Kit粒巨噬集落激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌()组织相容性复合体蛋白1抗体Human NOTCH1(Neurogenic locus notch homolog protein 1) ELISA Kit粒集落激因子(G-CSF)ELISA试剂盒
地衣芽孢杆菌微丝相关蛋白3样抗体Human MIOX(Inositol oxygenase) ELISA Kit利什曼原虫抗体(Leishimaria Ab)ELISA试剂盒
核盘菌微粒体甘油三酯转运蛋白Human VDR(Vitamin D3 receptor) ELISA Kit利钠肽(ANP)ELISA试剂盒
: ATCC53432资源名称: 运动发酵单胞菌 质量规格:>99%,标准品芍药苷
恶臭假单胞菌Pseudomonas│putida 质量规格:>98%,BR芸香柚皮苷
: 399资源名称: 黄麻链霉菌 质量规格:>99%,分子生物学飞蓟宾
牛巴氏杆菌(PB)检测试剂盒(荧光-PCR法)规格邻甲酚呋酞;2-甲酚酞, 3,3′-二甲基酚酞;3,3-双(4-羟基-3-甲基苯基)-1(3H)-异苯并呋喃酮;邻甲苯酚酞;3,3'-二甲酚酞;邻甲酚酜酞
o-Cresolphthalein
其他 3,3′-Dimethylphenolphthalein;3,3-Bis(4-hydroxy-3methylphenyl)-1-(3H)-isobenzofura
产品规格: IND
包装:25克/1公斤
CAS号:596-27-0
别:IND
pH变色域:8.2(无色)~9.8(红色)
红外光谱鉴定:和对照品匹配
性状:黄色结晶性粉末。易溶于乙醇和冰乙酸,溶于稀碱溶液呈紫色,微溶于水,不溶于苯。熔点223℃。大吸收波长 566(381)nm
用途:生化研究。酸碱指示剂
保存:RT