服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 转基因玉米品系3272检测试剂盒(PCR-荧光探针法)品牌 | GOY-01P64158 | 48T 0.1PCR管 |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
枯草芽孢杆菌磷酸化谷氨酸受体1抗体Human UBL3 ELISA Kit大鼠烟酰腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)免疫试剂盒
沙阿霉素链霉菌G蛋白偶联受体48抗体Human UBE4A ELISA Kit大鼠烟碱型乙酰胆碱受体(N-AChR)免疫试剂盒
栖沙盐水孢菌G氨基丁酸A型受体α2/GABAA Rα2抗体Human UBE2K ELISA Kit大鼠牙本质磷蛋白(DPP)免疫试剂盒
果生链核盘菌G氨基丁酸A型受体α4/GABAA Rα4抗体Human UBE2L3 ELISA Kit大鼠牙本质基质蛋白1(DMP1)免疫试剂盒
G氨基丁酸A型受体α6/GABAA Rα6抗体Human UBL4A ELISA Kit大鼠循环免疫复合物(CIC)免疫试剂盒
包围漆斑菌磷酸化γ1氨基丁酸受体GABAA Rβ1抗体Human UBE4B ELISA Kit大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)免疫试剂盒
绿色木霉G氨基丁酸受体β2/GABAA Rβ2抗体Human UBE2H ELISA Kit大鼠血小板因子3(PF-3)免疫试剂盒
产朊假丝酵母G蛋白偶联受体17抗体Human IDH2(IsocitRate dehydrogenase [NADP], mitochondrial) ELISA Kit大鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)免疫试剂盒
红曲霉G蛋白偶联受体102抗体Human UBE2G2 ELISA Kit大鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)免疫试剂盒
炭生褐褶菌G蛋白偶联受体136抗体Human UBL4A ELISA Kit大鼠血小板衍生生长因子B(PDGF-B)免疫试剂盒
谷氨酸棒杆菌G蛋白偶联受体126抗体Human UBE2K ELISA Kit大鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌G蛋白偶联受体105抗体Human UBE2J2 ELISA Kit大鼠血小板衍生生长因子AA(PDGF-AA)免疫试剂盒
葡球菌科G蛋白偶联受体C5B抗体Human UBL3 ELISA Kit大鼠血小板衍生生长因子A(PDGF-A)免疫试剂盒
格氏乳球菌G蛋白偶联受体33抗体Human UBE2E2 ELISA Kit大鼠血小板生成素(TPO)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌谷氨酸受体红藻氨酸离子1抗体Human UBE2L3 ELISA Kit大鼠血小板膜糖蛋白IIb(GPIIb)免疫试剂盒
黄色篮状菌一般受体磷酸肌相关支架蛋白1抗体Human UAP1L1 ELISA Kit大鼠血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)免疫试剂盒
链格孢霉属Alternaria│sp. 质量规格:干燥剂用麦角甾
苏云金芽孢杆菌幕虫亚种Bacillus│thuringiensis subsp. finitimus 质量规格:60-80目,气相、液相色谱柱紫花胡苷
副猪嗜血杆菌Haemophilus│parasuis 质量规格:80-100目,气相、液相色谱柱纤细薯蓣皂苷
转基因玉米品系3272检测试剂盒(PCR-荧光探针法)品牌玫瑰红B;碱性紫10;四乙基罗丹明;若丹明B;罗丹明610;蕊香红B;玫瑰精B;蓝光碱性蕊香红;碱性桃红;9-(2-羧基苯基)-3,6-双(二乙氨基)占吨翁氯化物;碱性玫瑰精;碱性玫瑰精B
Rhodamine B
其他 Rhodamine 610;Rhodamine O;Brilliant pink B;Tetraethyl rhodamine;C.I Basic violet10;C.I Food red 15;Pilot578
产品规格: AR
包装:25克/500克
CAS号:81-88-9
别:AR
灵敏度试验:合格
水溶解试验:合格
灼烧残渣:≤0.25%
性状:绿色结晶或红紫色粉末。易溶于水、乙醇,微溶于丙酮、、氢氧化钠溶液(溶于约70分水,10分醇,150分),水溶液为蓝红色,稀释后有强烈荧光。约260℃熔结,约280℃熔融。大吸收波长 552nm。大荧光波长 610nm。激光峰值波长 610nm。调谐范围 578~610nm。中等毒,半数致死量(大鼠,经口)500mG/kG。
用途:生化研究。光度测定金、镓、汞、锑(V),荧光测定锰、钴等,比 色测定镉。氧化 还原指示剂用以滴定锡、锑、铌、钽的沉淀剂。生物染色剂。系列激光染料
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。