操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 转基因玉米品系Bt176检测试剂盒(PCR-荧光探针法)品牌 | GOY-01P64154 | 48T 0.1PCR管 |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
拟香味类香味菌磷酸化GATA结合蛋白3抗体Human UNC45A ELISA Kit大鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)免疫试剂盒
沙氏芽孢杆菌延伸因子G2抗体Human UQCR ELISA Kit大鼠游离脂肪酸(FFA)免疫试剂盒
姬松茸*葡糖淀粉酶抗体Human UNC45B ELISA Kit大鼠游离原卟啉(FEP)免疫试剂盒
酿酒酵母谷氨酰6-磷酸果糖转移酶抗体Human UNC5A ELISA Kit大鼠游离状腺原氨酸(Free-T3)免疫试剂盒
热带假丝酵母谷胱甘肽S转移酶θ抗体Human UNC5CL ELISA Kit大鼠游离肉碱免疫试剂盒
樟疫霉谷胱甘肽S转移酶θ2抗体Human UNC5D ELISA Kit大鼠游离列腺特异性抗原(fPSA)免疫试剂盒
柠檬色葡球菌γ-谷氨酰转肽酶6抗体Human UNG ELISA Kit大鼠游离甲状腺素(FT4)免疫试剂盒
闪光须霉颗粒酶A抗体Human UNKL ELISA Kit大鼠游离睾酮(F-TESTO)免疫试剂盒
金灰青霉颗粒酶D/B/E/N/G/F/H抗体Human UQCR ELISA Kit大鼠游离雌三(FE3)免疫试剂盒
红曲红曲粒-巨噬集落激因子3受体抗体Human UNC45A ELISA Kit大鼠游离β绒毛膜促性腺激素(f-βCG)免疫试剂盒
分枝卷霉血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗体Human UNC45B ELISA Kit大鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)免疫试剂盒
溶藻弧菌G蛋白修补结构域蛋白3抗体Human UNC5A ELISA Kit大鼠硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)免疫试剂盒
豇豆慢生根瘤菌G蛋白偶联受体GPR63蛋白抗体Human UGT8 ELISA Kit大鼠吲哚2,3-双加氧酶(IDO)免疫试剂盒
猪链球菌磷酸化珠蛋白转录因子1抗体Human UHMK1 ELISA Kit大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)免疫试剂盒
成团泛菌G蛋白偶联受体109A抗体Human POMT1(Protein O-mannosyl-transferase 1) ELISA Kit大鼠抑制素B(INH-B)免疫试剂盒
孟氏假单胞菌G蛋白偶联受体15抗体Human UHRF1BP1L ELISA Kit大鼠抑制素A(INH-A)免疫试剂盒
蜡样芽孢杆菌Bacillus│cereus 质量规格:AR,200目,粉末状,褐色去泽拉木
大肠埃希氏菌Escherichia│coli 质量规格:CP,200目,粉末状,褐色人参皂苷F3
三叶草根瘤菌Rhizobium│trifolii 质量规格:AR,20-50目莱苞迪甙D
转基因玉米品系Bt176检测试剂盒(PCR-荧光探针法)品牌媒染蓝29媒染兰29;酸性媒介蓝;3〞-磺基-2〞,6〞-二氯-3,3ˊ-二甲基-4-羟基品红酮-5,5ˊ-二羧酸三钠盐
Chromeazurol S
其他 Mordant Blue 29;C.I. 43825;Trisodium 5-[(3-carboxylato-5-methyl-4-oxo-2,5-cyclohexadien-1-ylidene)(2,6-dichloro-3-sulphonahenyl)methyl]-2-hydroxy-3-methylbenzoate
产品规格: AR
包装:10克
CAS号:1667-99-8
别:AR
红外光谱鉴定:合格
紫外光谱:合格
λmax:425~435nm(in water)
金属滴定灵敏性试验:合格
性状:棕黑色粉末;易溶于水,为棕黄色溶液、溶于醇,溶液呈红棕色
用途:生化研究。指示剂,用以螯合滴定铝、钙、铁、镍和钍。分光光度测定铝、铍、铈、钴、铬、铜、铁、镓、铪、铟、镧、锰、钼、镍、钯、铑、钪、钍、钛、钒、钇、锌、锆等金属离子和氟化物
保存:RT,保质期5年