
服务流程:接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 对虾黄头病病毒(YHV)检测试剂盒(荧光PCR法)品牌 | GOY-01P64078 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
杏鲍菇背神经管核蛋白抗体Human SLC51B (Organic solute transporter subunit beta) ELISA KIT人P2蛋白抗体(IgM)免疫试剂盒
白浅灰链霉菌双甲基精氨酸水解酶1抗体Human OAZ1 (Ornithine decarboxylase antizyme 1) ELISA KIT人P2蛋白抗体(IgG)免疫试剂盒
美澳型核果褐腐病菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶DCAMKL1抗体Human GPNMB (Transmembrane glycoprotein NMB) ELISA KIT人P27蛋白(P27)免疫试剂盒
玫瑰色库克菌唐氏综合征粘附分子抗体Human OXGR1 (2-oxoglutarate receptor 1) ELISA KIT人P0蛋白抗体(IgM)免疫试剂盒
大肠埃希菌磷脂酸磷酸酶HTPAP抗体Human ELN(Elastin) ELISA Kit人P0蛋白抗体(IgG)免疫试剂盒
雷氏普罗菲登斯菌穿膜蛋白DLK1抗体(C端)Human OSCAR (Osteoclast-associated immunoglobulin-like receptor) ELISA KIT人OJ抗体/抗异亮氨酰tRNA合成酶抗体(OJ/IleRS)免疫试剂盒
塔宾曲霉二氢叶酸还原酶样1抗体Human ODF3L1 (Outer dense fiber protein 3-like protein 1) ELISA KIT人N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)免疫试剂盒
果生链核盘菌脱氧尿苷三磷酸酶DUT抗体Human OMD(Osteomodulin) ELISA Kit人N-乙酰-β-D-氨基葡糖苷酶(NAG)免疫试剂盒
产马乳酒乳杆菌高加索酸奶粒亚种桥粒芯蛋白3抗体Human OSBP2 (Oxysterol-binding protein 2) ELISA KIT人N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)免疫试剂盒
白孢链霉菌逝霉素变种癌基因删除蛋白2抗体Human PNLIPRP1 (Inactive pancreatic lipase-related protein 1) ELISA KIT人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)免疫试剂盒
半裸镰孢菌DNA损伤诱导转录蛋白4抗体Human PRRX1 (Paired mesoderm homeobox protein 1) ELISA KIT人N端中段骨钙素(N-MID-OT)免疫试剂盒
细黄链霉菌乳糖变种癌相关蛋白DRES17抗体Human PALLD (Palladin) ELISA KIT人N端脑钠素(NT-proBNP)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌周期调控蛋白SDP35抗体Human NPY4R (Neuropeptide Y receptor type 4) ELISA KIT人NOD样受体(NLR)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌枯草亚种DNA损伤自噬调整蛋白抗体Human SLC22A3 (Solute carrier family 22 member 3) ELISA KIT人NET-1 免疫试剂盒
平滑假丝酵母脑发育同源蛋白1抗体Human ORC2 (Origin recognition complex subunit 2) ELISA KIT人NADPH氧化酶3(NOX3/MOX2)免疫试剂盒
粉红掷孢酵母间粘附分子非整合素蛋白3抗体Human PPDPF (Pancreatic progenitor cell differentiation and proliferation factor) ELISA KIT人NADPH氧化酶1(NOX1/MOX1/NOH1)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌Bacillus│subtilis 质量规格:1000μg/ml叶黄素
恶臭假单胞菌Pseudomonas│putida 质量规格:1000μg/ml in 10%HCl褪黑素
施氏假单胞菌Pseudomonas│stutzeri 质量规格:1000mg/L,溶剂:1%盐酸山梨酸
对虾黄头病病毒(YHV)检测试剂盒(荧光PCR法)品牌牛肉浸膏:5.0
酵母浸粉:1.0
丙酮酸钠:10.0
甘氨酸:12.0
氯化锂:5.0
琼脂:13-15.0
增菌剂:50ml
PH:7.0⁻⁷.4
用法:称取本品56g,加950ml蒸馏水,浸泡10分钟,加热煮沸溶解,分装95ml,经121℃灭菌15分钟,冷至60℃加入卵黄亚碲酸钾溶液5ml,摇匀倾注平板
标准:GB/T4789.28-2008
性状:干燥粉末。易吸湿。
用途:生化研究。用于金黄色葡球菌的分离培养
保存:RT