操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 对虾白斑综合症病毒(WSSV)检测试剂盒(荧光PCR法)价格 | GOY-01P64076 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
盾形环柄菇磷酸化动力相关蛋白1抗体Human PITPNC1 (Cylasmic phosphatidylinositol transfer protein 1) ELISA KIT人SH2携带蛋白(SHC/SLP⁻⁷6)免疫试剂盒
西瓜枯萎病菌(可订)DNA连接酶4抗体Human PTDSS1 (Phosphatidylserine synthase 1) ELISA KIT人Seryl- tRNA合成酶,质(SARS/SERS)免疫试剂盒
大肠埃希氏杆菌二肽基肽酶6抗体Human NAGA(Alpha-N-acetylgalactosaminidase) ELISA Kit人Salusin Beta(Salusin β)免疫试剂盒
侧耳二氢叶酸还原酶抗体Human CACNA1A(Voltage-dependent P/Q-type calcium channel subunit alpha-1A) ELISA Kit人Salusin Alpha(Salusin α)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌有丝分裂控制样蛋白DIS3L抗体Human NKAP(NF-kappa-B-activating protein) ELISA Kit人SAA/LDL复合物 免疫试剂盒
蓖麻油鉴别试剂有丝分裂控制蛋白样DIS3L2抗体Human PTDSS1 (Phosphatidylserine synthase 1) ELISA KIT人S100钙结合蛋白P(S100P)免疫试剂盒
红淡紫灰链霉菌DOM3Z蛋白抗体Human PCID2 (PCI domain-containing protein 2) ELISA KIT人S100钙结合蛋白A9/钙粒蛋白B(S100A9)免疫试剂盒
麦芽糖假丝酵母蓬乱蛋白2抗体Human PDIK1L (Serine/threonine-protein kinase PDIK1L) ELISA KIT人S100钙结合蛋白A8/钙粒蛋白A(S100A8)免疫试剂盒
台湾无色需碱菌磷酸化蓬乱蛋白2抗体Human PELI3 (E3 ubiquitin-protein ligase pellino homolog 3) ELISA KIT人S100钙结合蛋白A8/A9复合物(S100A8/A9)免疫试剂盒
细链格孢转录下调蛋白1抗体Human MYH11(Myosin-11) ELISA Kit人S100钙结合蛋白A6/钙粒蛋白A(S100A6)免疫试剂盒
叶生布勒担子酵母脱氢酶/还原酶家族成员2抗体Human PROCA1 (Protein PROCA1) ELISA KIT人S100钙结合蛋白A12/钙粒蛋白C(S100A12)免疫试剂盒
谷氨酸棒杆菌牙本质磷蛋白抗体Human R3HDML (Peptidase inhibitor R3HDML) ELISA KIT人S100钙结合蛋白A11(S100A11)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌Dermokine β蛋白抗体Human PPP1R13B (Apoptosis-stimulating of p53 protein 1) ELISA KIT人RNA结合蛋白FUS(FUS/TLS)免疫试剂盒
柔嫩艾美耳球虫DPCR1蛋白抗体Human POMK (Protein O-mannose kinase) ELISA KIT人Rho家族GTP酶1(RND1)免疫试剂盒
Methylobacterium variabile表皮源性蛋白6抗体Human PKN1 (Serine/threonine-protein kinase N1) ELISA KIT人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)免疫试剂盒
金耳双特异性蛋白磷酸酶7抗体Human METRN(Meteorin) ELISA Kit人Rho GDP解离抑制因子1(ARHGDIA/GDIA1)免疫试剂盒
龟裂链霉菌Streptomyces│rimosus 质量规格:1000μg/ml睾酮
枯草芽孢杆菌Bacillus│subtilis 质量规格:100μg/mL,基体: 10%HCl
: =NRRL1808资源名称: 米曲霉 质量规格:100μg/ml,基体:HCI
对虾白斑综合症病毒(WSSV)检测试剂盒(荧光PCR法)价格牛心浸粉:4.0
蛋白胨:5.0
酪蛋白胨:16.0
氯化钠:5.0
葡糖:2.0
磷酸氢二钠:2.5
琼脂:13.5
PH(25℃):7.4±0.2
用法:称取本品52.0g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。
尿素酶实验底物配制:2g尿素和10mg苯酚红溶解于100ml蒸馏水中,调PH值至5.0±0.3,2-8℃可保存一周
性状:干燥粉末。易吸湿。
用途:生化研究。营养丰富,用于培养各种细菌
保存:RT