
服务流程:接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 小反刍兽疫病毒检测试剂盒(荧光PCR法)品牌 | GOY-01P64062 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
灿烂类芽孢杆菌磷酸化DNA甲基转移酶1抗体Human SUPT5H (Transcription elongation factor SPT5) ELISA KIT人臂板蛋白3F(S3F)免疫试剂盒
纺锤形赖氨酸芽孢杆菌磷酸化DNA甲基转移酶1抗体Human TPRA1 (Transmembrane protein adipocyte-associated 1 homolog) ELISA KIT人臂板蛋白3A(Sema 3A)免疫试剂盒
变异链霉菌磷酸化DNA甲基转移酶1抗体Human IGFLR1 (IGF-like family receptor 1) ELISA KIT人吡哆/吡哆维生素B6磷酸酶(PDXP)免疫试剂盒
肠沙门氏菌肠亚种7脱氢胆固还原酶抗体Human TCHHL1 (Trichohyalin-like protein 1) ELISA KIT人吡哆/吡哆维生素B6激酶(PDXK)免疫试剂盒
大肠埃希氏杆菌大脑发育同源蛋白2抗体Human TAP2 (Antigen peptide transporter 2) ELISA KIT人鼻病(RV)抗体(IgA)免疫试剂盒
酱油曲霉退行性精母同源物1抗体Human TMPPE (Transmembrane protein with metallophosphoesterase domain) ELISA KIT人苯酸诺龙/苯酸去甲睾酮(NP)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌DSCC1蛋白抗体Human HADHB (Trifunctional enzyme subunit beta, mitochondrial) ELISA KIT人本周蛋白(BJP)免疫试剂盒
玉蜀黍赤霉诱捕受体2抗体Human TRMU (Mitochondrial tRNA-specific 2-thiouridylase 1) ELISA KIT人胞质动力蛋白(CD)免疫试剂盒
毛柄金钱菌(金针菇)DNA甲基转移酶相关蛋白1抗体Human TRIO (Triple functional domain protein) ELISA KIT人胞外超氧化物歧化酶(SOD3)免疫试剂盒
锥形赤褶菇2-3减数分裂同源蛋白DMC1抗体Human SUPT5H (Transcription elongation factor SPT5) ELISA KIT人胞浆型磷脂酶A2-α(cPLA2-α)免疫试剂盒
威氏芽孢杆菌DNA连接酶3抗体Human DAO(D-amino-acid oxidase) ELISA Kit人包虫抗体IgG 免疫试剂盒
猪丹丝菌磷酸化DNA依赖性蛋白激酶抗体Human TPRA1 (Transmembrane protein adipocyte-associated 1 homolog) ELISA KIT人膀胱肿瘤抗原(BTA)免疫试剂盒
枯草芽胞杆菌磷酸化DNA依赖性蛋白激酶抗体Human TMPPE (Transmembrane protein with metallophosphoesterase domain) ELISA KIT人膀胱癌抗原(UBC)免疫试剂盒
希尔青霉DNA聚合酶δ2/DNA pol δ 2抗体Human IGFLR1 (IGF-like family receptor 1) ELISA KIT人伴侣蛋白10(CPN10)免疫试剂盒
毕赤酵母DNA聚合酶δ催化亚单位/DNA pol δ cat抗体Human TRAF3IP3 (TRAF3-interacting JNK-activating modulator) ELISA KIT人半乳糖凝集素⁻⁷(Gal⁻⁷)免疫试剂盒
蜡状芽孢杆菌DNA聚合酶η抗体Human TBKBP1 (TANK-binding kinase 1-binding protein 1) ELISA KIT人半乳糖(Galactose)免疫试剂盒
地衣芽孢杆菌Bacillus│licheniformis 质量规格:1000μg/ml,溶剂:1.5 mol/L HNO3土荆皮酸
芽胞杆菌Bacillus│sp. 质量规格:1000mg/l,溶剂:1%硫酸原花青素B1
盐单胞菌Halomonas│sp. 质量规格:500mg/l,溶剂:1%硫酸里奥林
小反刍兽疫病毒检测试剂盒(荧光PCR法)品牌偶氮荧光桃红;偶氮焰红;酸性红1;食品红10;5-(乙酰基氨基)-4-羟基-3(苯基偶氮)-2,7-萘二磺酸二钠盐;酸性红G;酸性大红G;偶氮萤光桃红;8-乙酰氨基-2-苯偶氮基-1-萘酚基-3,6-二磺酸二钠盐
Azophloxine
其他 Acid Red 1;Disodium 5-acetylamino-4-hydroxy-3-(phenylazo)naphthalene-2,7-disulphonate
产品规格: FMP
包装:25克
CAS号:3734-67-6
别:For microscopy
λmax:503~507nm(H2O)
λmax.2:530~534nm(H2O)
吸光度Absorbance(E1%1cm):≥250(H2O, 503~507nm)
吸光度Absorbance(E1%1cm):≥250(H2O, 530~534nm)
性状:红色粉末,溶于水为大红色溶液,微溶于酒精和溶纤素,不溶于其他有机溶剂。遇浓硫酸呈蓝光红色,将其稀释后呈较黄的红色;遇浓呈桔红色溶液,后转橙色;遇浓盐酸生成红色沉淀,稀释后即溶解。其水溶液加浓盐酸呈红色;加氢氧化钠液呈桔棕色。染色时遇铜离子使色泽带蓝光而暗;遇铁离子色泽带蓝光而浅。匀染性好。Colour Index Number 18050
用途:生化研究。染色剂
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