
服务流程:接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 猪细小病毒检测试剂盒(荧光PCR法)品牌 | GOY-01P64050 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
毛簇木霉2号染色体开放阅读框18抗体Human SLC50A1(Sugar transporter SWEET1) ELISA Kit人电子转运黄素蛋白-泛醌氧化还原酶/电子转运黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)免疫试剂盒
植物乳杆菌植物亚种色素c氧化酶6抗体Human SNAP25(Synaptosomal-associated protein 25) ELISA Kit人电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)免疫试剂盒
尔链霉菌嗜酸粒趋化蛋白24抗体Human DDR2(Discoidin domain-containing receptor 2) ELISA Kit人电压门控通道抗体(VGKC-ab)免疫试剂盒
束红球菌巨噬炎性蛋白15Human NFE2L1(Nuclear factor erythroid 2-related factor 1) ELISA Kit人电压门控通道(VGKC)免疫试剂盒
美澳型核果褐腐病菌巨噬炎性蛋白抗体Human PTGES(Prostaglandin E synthase) ELISA Kit人第八因子相关抗原(FⅧAg)免疫试剂盒
黄色篮状菌CD72蛋白抗体Human CHAD(Chondroadherin) ELISA Kit人第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶(PTEN/MMAC1)免疫试剂盒
粗毛假蜜环菌中心体蛋白128抗体Human SNAP25(Synaptosomal-associated protein 25) ELISA Kit人抵抗素样分子β(RELM-β)免疫试剂盒
酿酒酵母着丝粒蛋白O抗体Human SLC50A1(Sugar transporter SWEET1) ELISA Kit人抵抗素(Resistin)免疫试剂盒
阿达青霉3号染色体开放阅读框17抗体Human TTPAL(Alpha-tocopherol transfer protein-like) ELISA Kit人低氧诱导因子3α(HIF-3α)免疫试剂盒
烟曲霉质膜微囊蛋白-2抗体Human HSPE1(10 kDa heat shock protein, mitochondrial) ELISA Kit人低氧诱导因子2(HIF-2)免疫试剂盒
成晶节杆菌磷酸化质膜微囊蛋白-2抗体Human LIG3(DNA ligase 3) ELISA Kit人低氧诱导因子1α(HIF-1α)免疫试剂盒
隆德假单胞菌3号染色体开放阅读框24抗体Human C1S(Complement C1s subcomponent) ELISA Kit人低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)免疫试剂盒
噬果胶黄杆菌补体C3b抗体Human PGLYRP2(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase) ELISA Kit人低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP-4)抗体(IgG)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌补体C3b-α链抗体Human COLEC11(Collectin-11) ELISA Kit人低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP-4)免疫试剂盒
鸭疫里默氏杆菌CD3抗体Human CD109(CD109 antigen) ELISA Kit人低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)免疫试剂盒
天麻萌发菌8103号*着丝粒蛋白C1抗体Human CNTN1(Contactin-1) ELISA Kit人低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)免疫试剂盒
黄蓝状菌Talaromyces│flavus 质量规格:分析标准品,≥99.0% (GC)通关藤皂苷I
假丝酵母(加词待译)Candida│fukuyamaensis 质量规格:分析标准品通关藤皂苷G
不动杆菌Acinetobacter│sp. 质量规格:0.98知母皂苷A1
猪细小病毒检测试剂盒(荧光PCR法)品牌膨润土;浆土;胶状黏土;斑脱岩;胶膨润土;胶体粘土;胶质粘土;高钠膨润土;泥浆膨润土;班脱岩
Bentonite
其他 Wilkinite;Denver clay;Paper clay
产品规格: CP
包 装: 500克
CAS号:1302⁻⁷8-9
别:CP
膨胀性试验:合格
胶质性试验:合格
PH:8.0~11.0
砷:≤0.001%
砂质:≤0.05%
性状:浅黄色或乳细粉。是一种天然胶质的水合硅酸铝。无气味。微有泥土味。不溶于水和有机溶剂,但能吸收12倍容积的水而溶胀、 在有机溶剂中不溶解也不溶胀
用途:生化研究。用作白蛋白及微粒的乳化剂和吸附剂,油类乳化剂。脱色剂。
保存:RT