服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 梅毒螺旋体检测试剂盒(荧光PCR法)规格 | GOY-01P64041 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
鲍比氏链霉菌钙调节蛋白-1抗体Human ANXA4(Annexin A4) ELISA Kit人肝生长因子激活物(HGFA)免疫试剂盒
塔宾曲霉半胱酸蛋白酶蛋白-6抗体(C端)Human TNNT3(Troponin T, fast skeletal muscle) ELISA Kit人肝生长因子(HGF)免疫试剂盒
易变链霉菌周期素A2抗体Human RAB11A(Ras-related protein Rab-11A) ELISA Kit人肝核因子1β(HNF-1B)免疫试剂盒
产酸克雷伯氏菌钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体Human RELB(Transcription factor RelB) ELISA Kit人肝素-血小板因子4复合物抗体(IgG)免疫试剂盒
唐菖蒲伯克霍尔德氏菌钙/钙调素依赖蛋白激酶2b/2γ抗体Human UCHL1(Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1) ELISA Kit人肝素结合EGF样生长因子(HBEGF)免疫试剂盒
酿酒酵母凋亡敏感性基因抗体Human PA2G4(ProlifeRation-associated protein 2G4) ELISA Kit人肝素辅因子II-凝血酶(HCII-T)复合物免疫试剂盒
链霉菌天冬氨酸-胱氨酸特异性蛋白酶家族抗体Human PDXP(Pyridoxal phosphate phosphatase) ELISA Kit人肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)免疫试剂盒
丁酸梭菌(20-30天)半胱酸蛋白酶-10抗体Human OAS3(2′-5′-oligoadenylate synthase 3) ELISA Kit人肝X受体β(LXRβ)免疫试剂盒
异常汉逊酵母半胱酸蛋白酶蛋白-12抗体Human PRDX6(Peroxiredoxin-6) ELISA Kit人肝X受体α(LXRα)免疫试剂盒
土星拟威尔酵母subsufficiens变种半胱酸蛋白酶蛋白-13抗体Human TTN(Titin) ELISA Kit人杆状病IAP重复包含蛋白2/3(BIRC2/3)免疫试剂盒
塔宾曲霉CD10抗体Human FSCN1(Fascin) ELISA Kit人甘油三酯(TG)免疫试剂盒
托鲁斯山链霉菌CD105抗体Human TPI1(Triosephosphate isomerase) ELISA Kit人甘油-3 - 磷酸脱氢酶(GAPDH/G3PDH)免疫试剂盒
香菇干生长因子受体/表面分化抗原抗体Human RNASE3/ECP(Ribonuclease A3/Eosinophil Cationic Protein) ELISA Kit人甘油二酯(DAG)免疫试剂盒
中慢生华癸根瘤菌氯离子通道蛋白2抗体Human PDXK(Pyridoxal kinase) ELISA Kit人甘露糖受体(MR)免疫试剂盒
大肠埃希菌角蛋白5抗体Human POMGNT1(Protein O-linked-mannose beta-1,2-N-acetylglucosaminyltransferase 1) ELISA Kit人甘露糖凝集素受体(MBLR)免疫试剂盒
纳西杆菌角蛋白8抗体Human HMGCS1(Hydroxymethylglutaryl-CoA synthase, cylasmic) ELISA Kit人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)免疫试剂盒
深红酵母Rhodotorula│rubra 质量规格:分析标准品洋艾素
盘多毛孢霉Pestalotia│sp. 质量规格:分析标准品,98.5%竹节参皂苷ⅣA
正青霉属Eupenicillium│sp. 质量规格:分析标准品,97.5%络石苷
梅毒螺旋体检测试剂盒(荧光PCR法)规格偏磷酸六钠;格来汉氏盐;卡甘;磷酸钠玻璃;格腊哈姆盐;六偏;六聚偏磷酸钠
Sodium hexametaphoshpate
其他 Sodium metaphosphate
产品规格: CP,95%
包装:500克
CAS号:10124-56-8
别:CP
含量:≥95.0%
pH(100g/L,25℃):5.0~6.5
澄清度试验:合格
还原高锰酸钾物质:合格
砷:≤0.0005%
磷酸盐:合格
焦磷酸钠:≤5.0%
硫酸盐:≤0.03%
氯化物:≤0.02%
铁:≤0.02%
重金属:≤0.003%
性状:无色透明玻璃片状粒状结晶。比重2.484(20℃),在空气中易潮解,易溶于水,20℃时每升水溶解973.2克,80℃时每升水溶解1744克,1%溶液的PH值为5.5-6.5左右,不溶于有机溶剂,在中性介质中,水解终产物为正磷酸盐。 吸湿性很强,露置于空气中能逐渐吸收水分而呈粘胶状物。能与碱土金属化合成可溶性复盐,因此有溶解水垢的功能,是一种良好的软水剂。熔点:616℃
用途:生化研究。用于锅炉用水软水剂、印染染浴的软水剂和造纸扩散剂。还用于缓蚀剂、浮选剂、分散剂和高温结合剂。其它用于洗涤器皿以及化学纤维中用以除去浆粕中的铁质。还用于土壤分析
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。