服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 斑点热立克次体检测试剂盒(荧光PCR法)品牌 | GOY-01P64006 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
格氏乳球菌凋亡加强结构域蛋白9抗体Human ASGR2(Asialoglycoprotein Receptor 2) ELISA Kit人兰尼碱受体2(RYR2)免疫试剂盒
脱皮毛球马勃*胆固氧化酶抗体Human ASK-1(Apoptosis Signal Regulating Kinase 1) ELISA Kit人兰尼碱抗体免疫试剂盒
金灰青霉半胱酸蛋白酶蛋白14抗体Human AP17(Apelin 17) ELISA Kit人赖氨酰氧化酶免疫试剂盒
香菇半胱酸蛋白酶蛋白5抗体Human AP13(Apelin 13) ELISA Kit人赖氨酸特异性脱甲基酶5A(JARID1A)免疫试剂盒
猪瘟病抗体Human AP(Allopregnanolone) ELISA Kit人醌NADH脱氢酶1(NQO1)免疫试剂盒
苍白杆菌属猪瘟病抗体Human ANG II R1-Ab(Angiotensin II Receptor 1 Antibody) ELISA Kit人跨膜结构域4亚家族成员11(MS4A11)免疫试剂盒
灰黄链霉菌嗜铬粒蛋白C抗体Human ANG II(Angiotensin II) ELISA Kit人空泡素相关蛋白A(VacA)免疫试剂盒
巴氏醋杆菌烟碱型乙酰胆碱受体α10/AChRα10抗体Human ANGPTL1(Angiopoietin Like Protein 1) ELISA Kit人空肠弯曲菌(CJ)抗体(IgM)免疫试剂盒
大肠埃希菌烟碱型乙酰胆碱受体α6/AChRα6抗体Human ANGPTL6(Angiopoietin Like Protein 6) ELISA Kit人空肠弯曲菌(CJ)抗体(IgG)免疫试剂盒
酿酒酵母烟碱型乙酰胆碱受体α9/AChRα9抗体Human Ang III(Angiotensin III) ELISA Kit人克雷白氏杆菌(klebsiella)免疫试剂盒
木拉克酵母属烟碱型乙酰胆碱受体δ/AChRδ抗体Human Anti-Surv(Anti-Survivin Antibody) ELISA Kit人克拉拉蛋白(CC16)免疫试剂盒
植物乳杆菌凋亡加强结构域蛋白8抗体Human ANKRD1(Ankyrin Repeat Domain 1) ELISA Kit人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)免疫试剂盒
耐热盐土生古菌凋亡加强结构域蛋白7抗体Human AP(Allopregnanolone) ELISA Kit人可溶性肿瘤坏死因子受体2(sTNF-R2)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌枯草亚种β衣被蛋白抗体Human AP17(Apelin 17) ELISA Kit人可溶性血小板内皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫试剂盒
隆纹黑蛋巢半胱酸蛋白酶4/11抗体Human ATF-1(Activating Transcription Factor 1) ELISA Kit人可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)免疫试剂盒
樟疫霉1号染色体开放阅读框187抗体Human AP13(Apelin 13) ELISA Kit人可溶性血管内皮蛋白C受体(sEPCR)免疫试剂盒
酿酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 质量规格:D,99.8%Ⅲ型胶原肽试剂盒半枝莲碱
南方盐单胞菌Halomonas│meridiana 质量规格:for HPLC,≥99.0%Ⅲ型胶原氨基末端肽试剂盒白芷属脑
死谷芽孢杆菌Bacillus│vallismortis 质量规格:for HPLC, ≥99.7%Ⅲ型胶原氨基端肽试剂盒Α-波菜甾
斑点热立克次体检测试剂盒(荧光PCR法)品牌葡糖:20.0
酵母浸粉:2.0
硫酸镁:0.5
磷酸氢二钾:1.0
PH:6.2~6.6
用法:称取本品28.5克,加1000ml蒸馏水,加热煮沸直至完全溶解,115℃高压灭菌20分钟,备用。
标准:中国药典2010年版
性状:细粉末状。易潮解。
用途:生化研究。用于无菌试验及真菌培养
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。