
服务流程:接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 诺如病毒GI/GII型和轮状病毒A组检测试剂盒(荧光PCR法)说明书 | GOY-01P63895 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
脑膜炎奈瑟菌支链氨基酸转氨酶2抗体Human GSG1L ELISA Kit小鼠层连蛋白/板层素(LN)免疫试剂盒
金龟子绿僵菌BCL2相关蛋白A1抗体Human GSPT2 ELISA Kit小鼠草膦乙酰转移酶(PAT)免疫试剂盒
谷氨酸棒杆菌B淋巴瘤蛋白3抗体Human GPRIN3 ELISA Kit小鼠不对称二甲基精氨酸(ADMA)免疫试剂盒
酿酒酵母转录因子MYB相关蛋白B抗体Human GPS2 ELISA Kit小鼠补体因子H(CFH)免疫试剂盒
腐生葡球菌腐生亚种防御素β1/Defensin β1抗体Human GPSM2 ELISA Kit小鼠补体片断5a(C5a)免疫试剂盒
酿酒酵母B活化因子受体抗体Human GPX4 ELISA Kit小鼠补体片断3a(C3a)免疫试剂盒
喜肌费尔酵母TNF家族B激活因子抗体Human GPX7 ELISA Kit小鼠补体蛋白5(C5)免疫试剂盒
橄榄链霉菌蛇巴曲酶抗体Human GPX5 ELISA Kit小鼠补体蛋白4(C4)免疫试剂盒
青紫黑链霉菌大脑蛋白2抗体Human GPX8 ELISA Kit小鼠补体蛋白3(C3)免疫试剂盒
猪链球菌分型血清参考品 血清型 SS34程序性死亡配体1抗体Human GRAMD1B ELISA Kit小鼠补体1抑制物抗体(C1INH)免疫试剂盒
乳微杆菌B7-H4抗体Human GRAMD4 ELISA Kit小鼠波形蛋白(VIM)免疫试剂盒
小马勃3-2β分泌酶抗体Human GRB7 ELISA Kit小鼠型肝炎抗体(IgG)免疫试剂盒
东方伊萨酵母相关死亡促进因子Bad抗体Human GRHPR(Glyoxylate Reductase/Hydroxypyruvate Reductase) ELISA Kit小鼠酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)免疫试剂盒
冷湖黄杆菌BaxHuman GRID1 ELISA Kit小鼠酮酸激酶(PK)免疫试剂盒
少根根霉程序性死亡配体2抗体Human GPS2 ELISA Kit小鼠二酰辅酶A脱羧酶,线粒体(MLYCD)免疫试剂盒
解蛋白弧菌胆汁酸盐输出泵/ATP结合盒转运蛋白11抗体Human GPSM2 ELISA Kit小鼠二酸单酰辅酶A(malonyl CoA) 免疫试剂盒
: =DSM44958=JCM12462资源名称: 氧化氨假诺卡氏菌 质量规格:纯度(铜):52.5~56.5%β葡糖酸苷酶试剂盒3,4,5-三氧基苯酸
酿酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 质量规格:>99%,BRβ葡糖苷酶试剂盒3,4,5-三氧基苯酸酯
猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒Arterivirus│Porcine respiratory and reproductive syndrome virus 质量规格:(Cu):36.0~38.0%,Tech Gradeβ萘酚试剂盒杨酸酯
诺如病毒GI/GII型和轮状病毒A组检测试剂盒(荧光PCR法)说明书肉豆蔻基三甲基氯化铵;乳化剂1431;三甲基十四烷基氯化铵;N,N,N-三甲基-1-十四烷氯化物;(1-十四烷基)三甲基氯化铵
TTAC
其他 Tetradecyltrimethylammonium chloride;N,N,N-Trimethyl-1-tetradecanaminium chloride;Myristyl trimethyl ammonium chloride
产品规格: 超纯,99%
包装:500克
CAS号:4574-04-3
别:Ultra Pure Grade
含量:≥99.0%
PH(5% in DI H2O):6~8
重金属:≤5ppm
干燥失重:≤0.1%
性状:结晶粉末
用途:生化研究。用于催化剂,乳化剂,消毒剂,杀菌基,抗静电剂等
保存:RT