服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 柯萨奇病毒A6型和A10型检测试剂盒(荧光PCR法)规格 | GOY-01P63865 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
芽孢杆菌二磷酸腺苷核糖基化因子鸟嘌呤核苷酸交换因子2抗体Human KLHDC4 ELISA Kit小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)免疫试剂盒
孢吸水链霉菌α增强子结合蛋白1抗体Human KLHL32 ELISA Kit小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)免疫试剂盒
荷叶蘑脊髓小脑共济失调10抗体Human KLHL35 ELISA Kit小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)免疫试剂盒
多栏纯洁杆菌蛋白激酶A锚定蛋白7抗体Human KLHL34 ELISA Kit小鼠糖原合成酶激酶(GSK)免疫试剂盒
苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种腺苷三磷酸结合盒转运体12抗体Human KRT12 ELISA Kit小鼠糖缺失性转铁蛋白(CDT)免疫试剂盒
Arthrobacter腺苷三磷酸结合盒转运体9抗体Human KLHL10 ELISA Kit小鼠糖皮质类固受体(GR)免疫试剂盒
弗雷德里克斯堡假单胞菌三磷酸腺苷结合盒转运蛋白4抗体Human KRT33B ELISA Kit小鼠糖皮质激素受体β(GR-β)免疫试剂盒
孢小克银汉霉肌动蛋白结合蛋白LIM3抗体Human KRT34 ELISA Kit小鼠糖皮质激素受体α(GR-α)免疫试剂盒
球孢白僵菌高尔基复合体相关蛋白1抗体Human KRT36 ELISA Kit小鼠糖类抗原199(CA199)免疫试剂盒
暗灰链霉菌乙酰辅酶A羧化酶1ACCα抗体Human KLHL4 ELISA Kit小鼠糖类抗原125(CA125)免疫试剂盒
酿酒酵母腺嘌呤核苷酸转运蛋白1、2、3、4抗体Human KLHL9 ELISA Kit小鼠糖化血红蛋白A1c(A1c)免疫试剂盒
芽孢杆菌去整合素样金属蛋白酶12Human KLRF1 ELISA Kit小鼠糖蛋白130(gp130)免疫试剂盒
磷酸化乙酰辅酶A羧化酶1ACCα抗体Human KRT40 ELISA Kit小鼠碳酸酐酶2(CA-2)免疫试剂盒
卡尔斯巴德唯盐菌膜粘连蛋白2受体抗体Human KPNA1 ELISA Kit小鼠碳酸酐酶1(CA-1)免疫试剂盒
单孢共头霉晚期糖基化终末产物特异性受体抗体Human KLRG1 ELISA Kit小鼠胎球蛋白A(Fetuin A)免疫试剂盒
球菌ADCK5蛋白抗体Human KLHL28 ELISA Kit小鼠胎盘生长因子(PLGF)免疫试剂盒
芽孢杆菌属Bacillus│sp. 质量规格:38000~42000 mpa.s白介素8试剂盒香叶
谷氨酸棒杆菌Corynebacterium│glutamicum 质量规格:>99%,BR白介素8试剂盒小檗红碱硫酸酯
短杆菌Brevibacterium│sp. 质量规格:>99%,5N白介素7试剂盒腺嘌呤
柯萨奇病毒A6型和A10型检测试剂盒(荧光PCR法)规格软脂酸甲酯;十六酸甲酯;十六烷酸甲酯
Methyl palmitate
其他 Methyl hexadecanoate
产品规格: AR,97%
包装:100克/500克
CAS号:112-39-0
别:AR
含量:≥97.0%
酸值:≤1mgKOH/g
性状:无色液体或结晶(-15℃乙醇中析出)。易溶于乙醇、丙酮、和苯,不溶于水。熔点29.5~30.5℃。沸点415~418℃(99.59kPA)。折光率(n45D)1.4310。闪点>110℃。
用途:生化研究。乳化剂、润湿剂、稳定剂和增塑剂的中间体。药物研究。气相色谱分析标准和固定液(高使用温度120℃)。
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。