
服务流程:接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 肠道病毒70型检测试剂盒(荧光PCR法)规格 | GOY-01P63849 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
尖孢镰孢α1微球蛋白抗体Human total SOD(superoxide dismutase) ELISA Kit猪β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)免疫试剂盒
多主葡壳菌α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体Human peptidoglycan(peptidoglycan) ELISA Kit猪β内啡肽(β-EP)免疫试剂盒
猪丹丝菌腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体Human CRTC2(CREB-regulated transcription coactivator 2) ELISA Kit猪β干扰素(IFN-β/IFNB)免疫试剂盒
木霉AMPK的相关蛋白激酶5抗体Human TNFα(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit猪α干扰素(IFN-α)免疫试剂盒
果生链核盘菌致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体Human MBD3(Methyl-CpG-binding domain protein 3) ELISA Kit猪αN乙酰葡糖糖苷酶(NAGLU)免疫试剂盒
芽孢杆菌属腺苷脱氨酶抗体Human IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit猪α1酸性糖蛋白(α1-AGP)免疫试剂盒
肠膜明串珠菌含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族4抗体Human TLR8(Toll-like receptor 8) ELISA Kit猪Tau蛋白免疫试剂盒
豇豆慢生根瘤菌ATRNL1蛋白抗体Human MBD2 ELISA Kit猪Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫试剂盒
爪哇拟青霉AFP4a蛋白抗体Human LCMT1(Leucine carboxyl methyltransferase 1) ELISA Kit猪S100B蛋白(S-100B)免疫试剂盒
多量毛霉铁蛋白Fe65样蛋白1抗体Human DNASE2(Deoxyribonuclease-2-alpha) ELISA Kit猪p物质(SP)免疫试剂盒
孟氏假单胞菌铁蛋白Fe65样蛋白2抗体Human Anti-LAMP2(Anti-lysosomal Associated Membrane Protein 2 Antibody) ELISA Kit猪P450胆固侧链裂解酶(P450scc)免疫试剂盒
长双歧杆菌β淀粉样蛋白体蛋白结合蛋白2抗体Human anti-2019-nCoV(N) IgG ELISA Kit猪N-乙酰-β-D-氨基葡糖苷酶(NAG)免疫试剂盒
油橄榄生曲霉早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体Human anti-2019-nCoV(N) IgM ELISA Kit猪Na+/K+-ATP酶(Na/K ATPase)免疫试剂盒
分枝农霉菌磷酸化蛋白激酶AKT1抗体Human FOLR3(Folate receptor gamma) ELISA Kit猪L-乳酸脱氢酶(L-LDH)免疫试剂盒
楚氏喜盐芽孢杆菌磷酸化蛋白激酶AKT1抗体Human CTHRC1(Collagen triple helix repeat-containing protein 1) ELISA Kit猪E选择素(E-Selectin/CD62E)免疫试剂盒
芽孢杆菌ASH1L蛋白抗体Human CH25H(Cholesterol 25-hydroxylase) ELISA Kit猪D-乳酸脱氢酶(D-LDH)免疫试剂盒
: NICPBP44180资源名称: 大肠埃希氏菌 质量规格:>97%,Biotech Grade酮酸激酶M2型同工酶试剂盒氧化槐定碱
微杆菌Microbacterium│sp. 质量规格:酶活:>50U/mg,进分酮试剂盒薏苡素
枯草芽孢杆菌Bacillus│subtilis 质量规格:>98%,分子生物学二酸单酰辅酶A试剂盒8-氧黄连碱
肠道病毒70型检测试剂盒(荧光PCR法)规格三号苏丹红;黄光油溶红;油红;苯基偶氮(4-偶氮-1)-2-萘酚;苏旦Ⅲ;苏丹红Ⅲ;1-[4-(苯基偶氮)苯基偶氮]-2-萘酚;溶剂红23;苯偶氮苯偶氮-2-萘酚;透明红HRR
Sudan Ⅲ
其他 Fat ponceau G;Sudan red;Cerasin red;Oil red;Solvent red 23;Tony red;Tetraazobenzene-β-naphthol, 1-(p-Phenylazophenylazo)-2-naphthol;Sudan red BK
产品规格: BS
包装:25克
CAS号:85-86-9
别:BS
生物染色试验:合格
吸收光谱试验:合格
性状:红棕色粉末。易溶于苯,溶于、冰乙酸、乙醇、丙酮、不挥发油、热甘油和挥发油,不溶于水。熔点 195℃。大吸收波长 507(354)nm。小致死量(兔,皮下)1000mg/kg。有刺激性
用途:生化研究。生物染色剂,如脂肪及其类似物质染色,苏丹Ⅲ可以用油红O代替
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