服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 脑膜炎奈瑟菌血清群B检测试剂盒(荧光PCR法)说明书 | GOY-01P63835 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
尖镰孢芳香烃受体核转录蛋白样2抗体Human MAML3 ELISA Kit猪血管生成素2(ANG-2)免疫试剂盒
美登木植物放线孢菌磷酸化芳香N-乙酰化转移酶抗体Human MAN2B2 ELISA Kit猪血管生成素1(ANG-1)免疫试剂盒
酿酒酵母肌动蛋白结合蛋白1抗体Human MAN1A2 ELISA Kit猪血管内皮粘附分子1(VCAM-1)免疫试剂盒
产黄青霉粘附分子IgG样结构域蛋白2抗体Human MANBAL ELISA Kit猪血管内皮生长因子(VEGF)免疫试剂盒
巨兽芽孢杆菌肌动蛋白结合蛋白DOC6抗体Human MANSC1 ELISA Kit猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)免疫试剂盒
pETPT7AFG3样蛋白2/脊髓小脑共济失调蛋白28抗体Human MANEA ELISA Kit猪血管紧张素转化酶2(ACE2)免疫试剂盒
芽孢杆菌属激活素受体相互作用蛋白1抗体Human MAP4K1(MEK Kinase Kinase 1) ELISA Kit猪血管紧张素转化酶(ACE)免疫试剂盒
粪肠球菌固酮类还原酶家族7成员A2抗体Human MAP4K2 ELISA Kit猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫试剂盒
柠檬黄色农球菌蛋白激酶AKT1,2,3抗体Human MAK ELISA Kit猪血管活性肠肽(VIP)免疫试剂盒
赤曲霉帕金森病相关蛋白ATP13A2抗体Human MAGED2 ELISA Kit猪旋毛虫IgG抗体免疫试剂盒
灰平链霉菌肌侧索硬化蛋白2抗体Human MAGED4 ELISA Kit猪胸腺肽β4(Thymosin β4)免疫试剂盒
茶树菇磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体Human MAGEF1 ELISA Kit猪心型脂肪酸结合蛋白(FABP3/FABP11/MDGI)免疫试剂盒
围小丛壳菌酰基辅酶A脱氢酶长链抗体Human MAGEH1 ELISA Kit猪心钠肽(ANP)免疫试剂盒
乳杆菌属分裂周期蛋白5抗体Human MBD2 ELISA Kit猪心肌特异性肌钙蛋白T(c)免疫试剂盒
假单胞菌属β淀粉样肽/Aβ42抗体Human MC3R(Melanocortin receptor 3) ELISA Kit猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫试剂盒
栗疫菌ADCK4蛋白抗体Human MBD3(Methyl-CpG-binding domain protein 3) ELISA Kit猪酰基辅酶A去饱和酶(SCD)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌Escherichia│coli 质量规格:150~400 mpa.s,BR肠道病71型试剂盒D-半乳糖酸
卢森坦海旋菌Thalassospira│lucentensis 质量规格:>98%,BC 层粘连蛋白亚基γ-2试剂盒7-木糖基-紫杉
帚霉属Scopulariopsis│sp. 质量规格:>98%,BC 层粘连蛋白β1试剂盒7-木糖苷-10-脱乙酰基紫杉
脑膜炎奈瑟菌血清群B检测试剂盒(荧光PCR法)说明书三羟甲基氨基甲烷醋酸盐;TRIS醋酸盐;三(羟甲基)氨基甲烷醋酸盐;醋酸三甲醇氨基甲烷
TRIS acetate salt
其他 Tris(hydroxymethyl)aminomethane acetate salt;Trizma acetate
产品规格: BR,99%
包装:25克/100克/500克
CAS号:6850-28-8
别:BR
含量:≥99.0%
PH(1%水溶液):6.1~6.7
熔点:116~123℃
重金属:≤5ppm
吸光度(280nm,1%水溶液):≤0.05
干燥失重:≤1.0%
性状:粉末,溶于水等有机溶剂。
用途:生化研究。在带有萤火虫荧光素酶ATP检测中,该品是灵敏的缓冲液;谷氨酸结合检测。
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。