操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 麻疹病毒和风疹病毒检测试剂盒(荧光PCR法)说明书 | GOY-01P63795 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
富马酸喹硫平英文名称: β-Amyloid (25-35)神经母瘤蛋白PHOX2B抗体包装100g
富马酸卢帕他定英文名称: β-MSH, human周期蛋白依赖性激酶5激活因子1抗体包装25g
富马酸马斯汀英文名称: β-MSH, monkey肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基5抗体包装1g
富马酸酮替芬英文名称: Ac-PACAP-38 (human, mouse,ovine, porcine, rat)浦肯野相关蛋白1抗体包装5g
富马酸伊布利特英文名称: Ac-YVAD-pNA凋亡诱导受体PLEKHG5抗体包装500g
枸橼酸莫沙比利英文名称: ACTH (1-10), human蛋白质磷酸酶2A-B55抗体包装100mg
枸橼酸喷托维林/托可拉斯/妥克拉司英文名称: ACTH (1-13), human棕榈酰蛋白解酶2抗体包装1g
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君英文名称: ACTH (1-16), human多谷氨酰结合蛋白1抗体包装250mg
骨化二英文名称: ACTH (1-17), human猪蓝耳病病抗体包装1g
骨化三英文名称: ACTH (1-24), human对氧磷酶3抗体包装25g
琥珀酸多西拉敏英文名称: ACTH(1-39),human蛋白质精氨酸亚型2抗体包装5g
琥珀酸舒马曲普坦英文名称: ACTH (1-39), rat磷酸乙转移酶2抗体包装10ml
华法林英文名称: ACTH (18-39), human磷脂酰肌结合网格蛋白组装蛋白抗体包装50ml
华法林钠英文名称: ACTH (4-10), human丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1调节亚基10抗体包装1g
环苯扎林盐酸盐英文名称: Adrenomedullin (22-52),human色素氧化酶装配因子PET112抗体包装25g
: F478资源名称: 帚状曲霉 质量规格:>98%环磷酸鸟苷试剂盒表儿茶素;L-Epicatechin
真姬菇(斑玉蕈,海鲜菇)Hypsizygus│marmoreus 质量规格:BR,进口原装环加氧酶2试剂盒杯苋甾酮;Cyasterone
枯草芽孢杆菌Bacillus│subtilis 质量规格:>98%,色素CYP17抑制剂踝蛋白试剂盒白花胡乙素;praeruptorin
麻疹病毒和风疹病毒检测试剂盒(荧光PCR法)说明书十八酸钙盐;十八酸钙;SCD润滑剂
Calcium stearate
其他 Octadecanoic acid calcium salt
产品规格: CP
包装:250克/1公斤/5公斤
CAS号:1592-23-0
别:CP
含量(以Ca计):6.6~7.4%
干燥失重:≤3.0%
重金属:≤0.004%
性状:颗粒状或脂肪性粉末。遇酸或碱分解。易溶于热吡啶,微溶于热乙醇、热的植物油和矿油,几乎不溶于水、、丙酮和冷乙醇。熔点179~180℃。
用途:生化研究。防水剂。润滑剂。聚氯乙烯树脂稳定剂
保存:RT