服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 转基因标记基因nptIIPCR试剂盒品牌 | GOY-01P63326 | 50次 |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)elisa试剂盒英文名称:uPAR ELISA Kit脱羧酶蛋白体36抗体包装500mg
尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)elisa试剂盒英文名称:uPA ELISA Kit间隙连接蛋白40抗体包装25g
鸟苷酸环化酶激活因子2A(GUCA2A)elisa试剂盒英文名称:GUCA2A ELISA Kit间隙连接蛋白43抗体包装5g
鸟氨酸脱羧酶(ODC)elisa试剂盒英文名称:ODC ELISA Kit间隙连接蛋白45抗体包装100g
黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM1)elisa试剂盒英文名称:MAdCAM1 ELISA Kit表面趋化因子受体1抗体包装25g
尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)elisa试剂盒英文名称:NOX4 ELISA Kit色素P450单氧化酶抗体包装500g
尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)elisa试剂盒英文名称:NOX1 ELISA Kit色素C抗体包装1g
尼克酰胺-N-基转移酶(NNMT)elisa试剂盒英文名称:NNMT ELISA Kit角蛋白1抗体包装1g
内脂素(VF)elisa试剂盒英文名称:VF ELISA Kit巨病PP65/CMV低基质磷脂蛋白抗体包装1g
内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子(Vaspin)elisa试剂盒英文名称:Vaspin ELISA Kit周期素C抗体包装5g
内皮脂肪酶(LIPG)elisa试剂盒英文名称:LIPG ELISA Kit周期素B1抗体包装1g
内皮抑素(ES)elisa试剂盒英文名称:ES ELISA Kit球蛋白抗体包装1g
内皮型一氧化氮合酶(NOS3)elisa试剂盒英文名称:NOS3 ELISA Kit周期素D1抗体包装1g
内皮细胞TEK酪氨酸激酶(Tie2)elisa试剂盒英文名称:Tie2 ELISA Kit周期素D2抗体包装5g
内皮素转化酶1(ECE1)elisa试剂盒英文名称:ECE1 ELISA Kit周期素E抗体包装25g
: A272资源名称: 假诺卡氏菌 质量规格:≥85%,BR肿瘤坏死因子β试剂盒紫云英苷;astragalin
短小盒菌Parvularcula│sp. 质量规格:纯度大于98%肿瘤坏死因子α转化酶试剂盒知母皂苷A-Ⅲ;Timosaponin
芽孢杆菌属Bacillus│sp. 质量规格:纯度> 99%肿瘤坏死因子α试剂盒樟脑;Camphor
转基因标记基因nptIIPCR试剂盒品牌硬脂酸甘油酯;单甘酯/甘油单硬酯酸酯;十八酸甘油酯;二羟基丙基十八烷酸酯;单甘脂;甘油酰-1-单硬脂酸
GMS
其他 1-Stearoyl-rac-glycerol; 1-Monooctadecanoyl-rac-glycerol;rac-Glycerol 1-stearate;DL-α-Stearin;Monostearin;Glycerol alpha-Monostearate
产品规格: CP
包装:100克/500克
CAS号:123-94-4
别:CP
碘值:≤6.0 I2g/100g
熔点:≥53℃
游离酸:≤1.0%
皂化值:166~172KOHmg/g
灼烧残渣:≤0.4%
性状:或微黄色蜡状固体或片状,有愉快的气味,有脂肪味。能溶于热的有机溶剂,如醚、苯、丙酮和矿物油,不溶于水。但在少量表面活性剂存在下,能在热水中分散。半数致死量(小鼠,腹腔)200mg/kg。商品常为甘油单硬脂酸酯和甘油单软脂酸酯的混合物。相对密度0.97。单甘酯为油包水型乳化剂,在热水中经强烈震荡而乳化。
用途:生化研究。人造奶油的增稠,油类和蜡等的溶剂,乳化剂,吸湿性粉末的保护剂,不透明遮光剂。气相色谱固定液(高使用温度125℃,溶剂为热乙醇),分离分析含氧化合物及挥发油
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。