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公司新闻
如何设置TUNEL实验的阳性对照
点击次数：215发布时间：2026/4/24 16:00:22
TUNEL实验的阳性对照通过人为诱导DNA断裂，验证试剂活性与实验流程的可靠性，确保凋亡信号可被正确检测。
设置方法
阳性对照的核心是使用DNase I处理样本，直接切割基因组DNA，制造大量3'-OH末端，从而在TUNEL染色中呈现强阳性信号。
操作步骤：
样本选择：可选用正常组织切片或未诱导凋亡的细胞爬片。
固定与通透：
组织切片：石蜡切片用蛋白酶K（20 μg/mL）室温孵育20分钟；冰冻切片用0.2% Triton X-100/PBS通透5–10分钟。
细胞样本：4%多聚甲醛固定15–25分钟，0.2% Triton X-100通透5分钟。
DNase I酶切反应：
配制工作液：100 μL 1× Reaction Buffer + 1 μL DNase I原液（终浓度约500 U/mL）。
滴加至样本，室温孵育10分钟（温度偏低可延长至15分钟）。
洗涤：PBS洗涤3–4次，避免残留DNase I污染实验组。
进入TUNEL染色流程：按试剂盒说明书加入TUNEL反应液，37℃避光孵育60分钟，封片观察。
预期结果
阳性对照细胞核应呈现均匀强绿色荧光（FITC）或棕褐色沉淀（DAB显色），表明DNA断裂充分，试剂系统有效。
关键注意事项
独立洗涤容器：阳性对照必须使用专用染色缸，防止DNase I残留导致实验组背景升高。
避免干片：操作全程保持样本湿润，防止非特异性染色或组织损伤。
试剂保存：DNase I需-20℃避光保存，避免反复冻融，建议分装使用。
