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公司新闻
古柏线虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素
点击次数：501发布时间：2022/7/25 16:18:11
古柏线虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二结构，避免两条引物间互补，特别是3＇端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3＇端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
小鼠细胞色素C(mouse Cytochrome C)
小鼠双链DNA(mouse dsDNA)
小鼠多巴胺(mouse Dopamine)
小鼠二胺氧化酶(mouse DAO)
小鼠D-二聚体(mouse D-Dimer)
小鼠二肽基肽酶Ⅳ(mouse DPP4)
小鼠β内啡肽(mouse β-EP)
小鼠表皮生长因子(mouse EGF)
小鼠表皮生长因子受体(mouse EGF R)
小鼠内皮素-1(mouse Endothelin-1)
小鼠噬酸性粒细胞趋化因子(mouse Eotaxin)
小鼠促红细胞生成素(mouse EPO)
小鼠红细胞生成素受体(mouse EPOR)
小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(mouse ECP)
小鼠上皮中性粒细胞活化肽-78(mouse ENA-78)
小鼠血管内皮抑素(mouse Endostatin)
小鼠肾上腺素(mouse EPI)
小鼠内皮细胞一氧化氮合酶(mouse eNOS)
小鼠雌二醇(mouse E2)
小鼠促卵泡素(mouse FSH)
小鼠凋亡相关因子(mouse Fas)
小鼠凋亡相关因子配体(mouse Fas Ligand)
小鼠酸性成纤维生长因子(mouse a-FGF)
小鼠碱性成纤维生长因子(mouse b-FGF/FGF-2)
小鼠Fibronectin（mouse Fibronectin）
