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腺病毒B型探针法荧光定量PCR试剂盒荧光定量PCR原理

点击次数:901发布时间:2021/3/9 15:55:22

腺病毒B型探针法荧光定量PCR试剂盒荧光定量PCR原理:

荧光定量PCR早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过个循环,收集个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到条荧光扩增曲线图。
般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。
试剂盒内容:
Store at -20°C
2× Real PCR EasyTM Mix-SYBR:包括特别改造的热启动 Taq DNAPolymerase、MgCl2、优化配比的 dNTPs 和 SYBR Green I、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR 反应时,只需将适当的裂解混合液、引物、DNase-ddH2O添加到2×Real PCR EasyTM Mix-SYBR中即可用于PCR反应。
ROX Reference Dye:般用于 ABI、Stratagene 等公司的 Real Time PCR 扩增仪上,用于调整 PCR 加样误差所引起的 PCR 管与管之的差异。不同仪器所需ROX Reference Dye 浓度不同,用户可以根据仪器的推荐浓度添加。DNase-Free ddH2O:超纯水,用于 PCR 反应。
试剂盒应用
荧光定量PCR进行模板定量分析。
常规PCR扩增。
样品要求及注意事项:
1、 如果提供实验材料,实验材料必须保证新鲜,请您采样后立刻放入液氮中速冻或加入样稳定剂,并用干冰运输。
2、 如果样品可以用Trigol法提总RNA ,也可以将样品研磨后放在 Trigol中,动植物组织 : 50~100mg/mlTrigol,贴壁细胞:10cm2/mlTrigol,悬浮细胞:5×106动植物,酵母细胞或细菌细胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我们要对您提供的材料进行评估。
4、 实时荧光定量PCR服务您定要提供样品及要扩增基因的详细信息。
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