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公司新闻
单克隆抗体—— 细胞杂交与选择培养
点击次数：894发布时间：2020/8/18 16:39:38
单克隆技术又名杂交瘤技术。由G.KÖhler和Milstein1975年创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。
单克隆抗体的制备过程主要有以六个环节，具体为抗原指标、免疫动物选择、免疫程序的确定、免疫、细胞杂交与选择培养。
细胞杂交与选择培养
（1）杂交筛选：细胞杂交之前，要分别准备好脾脏的B细胞悬液和小鼠骨髓瘤细胞。免疫后的小鼠脾脏在无菌条件下破碎，将B细胞悬浮在没有血清的培养液中并洗涤3次去掉小鼠的血清。细胞用培养液洗涤2-3次，把两种细胞合并在同—试管中，用50%的聚乙二醇作为融合剂，在37℃条件下融合1-2min。用培养液缓慢稀释，除去PEG，将存活细胞分散至HAT选择培养板中。融合后的细胞在培养皿上用HAT培养液(培养液中含10%-20%胎牛或小牛血清和HAT)在37℃，5%CO2进行培养。形成可用的细胞克隆后经过几次更换培养液后进行抗体活性检测（见抗体检测）。分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养，检测每孔细胞是否产生所注射抗原的抗体。
注意：在细胞融合后选择性培养过程中，由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活，通常需要加入饲养细胞使之繁殖。常用的饲养细胞有胸腺细胞、正常脾细胞和腹腔巨噬细胞。
（2）细胞培养：将筛选出来的细胞直接注射到小鼠的腹部，培养3-4天。吸取培养好小鼠的腹水，将抽取的腹水进行梯度离心就可以分离到纯净的单克隆抗体。
注意：细胞也可以在体外进行培养，不过体外培养对环境要求极高，很容易就感染了菌株从而造成整个实验的失败。在抽取腹水的时候不要多次抽取，尽量一次抽取成功，否则很容易感染菌株。
