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公司新闻
植物细胞悬液制备试剂盒 即用型酶溶液配制
点击次数：1020发布时间：2020/7/27 16:30:27
植物细胞悬液制备试剂盒 即用型酶溶液现用现配。
1. 取生长状态良好的叶片切成0.5-1mm的小条，按照20个叶片加10 ml即用型酶溶液的比例迅速将切 割好的叶片小条浸泡于酶溶液中，避光，常温酶解3小时。
注：酶解时间与叶片种类，叶片生长状态有关，请根据实验需要适当延长酶解时间。酶溶液变为绿 色表明有原生质体已经分离，显微镜镜检后确定是否分离。
2. 酶解后加入10 ml溶液II，轻柔混匀。
3. 用孔径70 μm筛网过滤步骤2中的溶液，去除未消化的叶片，收集滤出液于50ml离心管中。
4. 滤出液100g常温离心 2分钟，去除上清。
5. 加1 ml 溶液II重悬原生质体，冰浴30分钟（原生质体会自然沉淀于底部）。
6. 小心去除上清溶液，不要触动原生质体沉淀，沉淀重悬于1 ml溶液III中即为原生质体溶液。
原生质体转化：
1. 取10μl质粒DNA(浓度为1 -2μg/μl)于1.5ml 离心管中。
2. 加入100μl原生质体溶液，轻柔混匀。
3. 加入等体积即110μl 溶液IV-转化溶液，轻柔彻底混匀，常温放置15分钟，间歇轻柔混匀。
4. 加入2倍体积即440μl 溶液II，轻柔彻底混匀，终止转化过程。
5. 常温100g离心2分钟，去上清。
6. 沉淀重悬于1 ml溶液V中。
