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公司新闻
获得可溶性天然蛋白质的三个关键参数
点击次数：1201发布时间：2018/5/11 9:57:58
IPTG浓度
有可能，宿主中的蛋白表达将通过lac操纵子系统操作。这个系统的详细解释可以在别处找到，你加入异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG），一种乳糖类似物，控制蛋白的表达。蛋白的表达应处于生长的对数期，即当溶液的波长600（OD 600）处的光密度达到0.4-0.6。 如果你的目标是可溶性蛋白质，不要改变细胞中蛋白的折叠功能。已经假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侣的存在。因此，使用高浓度的IPTG（> 1mM）可能不总是产生的结果。尝试几个不同的浓度，看看哪一个给你的可溶性蛋白的产量。
温度
偶尔，你可以在37°C的典型温度下，通过生长和诱导分离可溶性形式的蛋白质，但通常情况下，溶解度在较低温度下增强。可尝试在30°C，25°C和18°C下进行诱导。 注意：如果首先在37℃生长，先让培养物冷却到诱导温度，再加入IPTG。
诱导时间
更长并不总是更好。对于对宿主有毒的蛋白尤其如此。在诱导期间，每隔几个小时取样，并检查目的蛋白的表达。典型的诱导时间根据温度而变化：对于37℃，尝试4小时;对于30℃，进行5-6小时，并且任何低于25℃的温度应该允许生长过夜。
预实验
将目的蛋白的编码序列克隆到具有不同标记（例如六组氨酸，谷胱甘肽-S-转移酶（GST），麦芽糖结合蛋白（MBP））的2-3个载体中。然后选择三种不同的诱导时间和温度以及几种IPTG浓度。进行小规模预实验。诱导后，分析每个样本中的（1）未诱导样本；（2）在不同时间点的诱导样本；（3）裂解物；（4）可溶性片段。
以上建议都没有达到预期的效果？
虽然遵循了上面的建议，你可能会发现，你仍然无法获得可溶性蛋白，或许可以尝试如下解决方案：
只表达目标蛋白的一部分：较小的结构域通常是可溶的，即使全长蛋白不是；
使用不同的表达系统：这甚至可能保留目标蛋白的翻译后修饰；
在变性条件下纯化：虽然不总是的方法，在变性条件下（即在高浓度的胍或尿素的离液盐中）纯化有时是唯一的解决方案。通常这些条件可以给你一个更纯的样品，因为可溶性污染蛋白被移除。唯一的问题是重折叠；然而，有许多方案可用于包涵体蛋白的重折叠。
Lorazepam Related Compound E25mg劳拉西泮相关物质E标准品773871-49-1
25mg非索非那定相关物质A标准品76811-98-8
25mg厄贝沙坦相关物质A标准品748812-53-5
Alprostadil25mg前列地尔标准品745-65-3
25mg美洛昔康相关物质B标准品7305-71-7
25mg右旋安非他命相关物质A标准品698-87-3
25mg地丹诺辛相关物质A标准品68-94-0
25mg硝苯地平硝苯吡啶同系物标准品67035-22-7
25mg奥沙利铂相关物质F标准品66845-32-7
