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公司新闻
无血清培养基收集细胞出现的问题
点击次数：1377发布时间：2018/2/9 10:19:21
采用无血清培养基收集细胞上清除了改变细胞的生理状态外（可能激活未知信号途径，诸如AKT等），还会出现的问题是：
1. 即使采用了无血清收集上清，仍然有大量杂蛋白，但相对好很多。
2. 选用了上清，由于蛋白浓度太稀，通常要采用TCA沉淀富集，再重新溶解。
a. TCA沉淀对半定量操作要求非常高，因为很容易沉淀不充分或者离心操作丢失，尤其在离心过程，离心管的摆放非常讲究，要180度翻转离心两次。
b。重新溶解时，由于蛋白需要在一定的盐离子条件下才能重新溶解，你要摸索充分溶解的条件，相对麻烦。
蛋白样品的制备是蛋白质组研究的第一步，无论后续采用怎样的分离或鉴定手段，样品制备都是关键步骤。因此，为了完全分析所有的细胞内蛋白，组织与细胞必须进行有效的破碎。
分泌型蛋白富集：
用无血清培养基培养细胞，收集上清液用于WB检测；如果含量过低，需要用TCA沉淀富集。
理论上，从普通培养基中收集分泌蛋白，此时对细胞生长条件的影响最小，是最佳的实验条件；但是这存在隐忧。因为含血清的培养基中含有非常丰富的BSA（牛血清白蛋白）之类的蛋白质，除非你进一步分离纯化，否则直接用这种样品去WB会有非常大的麻烦，尤其当你的蛋白在60-46kDa之间的时候；用“任何”抗体去检测这一区间的蛋白，都会有一片非常强的信号。因为此区间蛋白（主要是BSA）浓度过于富集，会非特异性粘附“任意”抗体，从而最终被识别。同理，采用SDS LB裂解细胞制备样品前，通常要用PBS洗涤，其目的之一是去除培养基中的BSA。
Aprepitant 50mg 阿瑞吡坦对照品标准品
Arginine Hydrochloride 1119-34-2 125mg 盐酸精氨酸标准品
Arsanilic Acid 98-50-0 25mg 阿散酸标准品
Artemether 71963-77-4 100mg 蒿甲醚标准品
Artemether Related Compound A 71939-50-9 15mg 蒿甲醚相关物质A标准品
Artesunate 88495-63-0 200mg 青蒿琥酯标准品
Articaine 23964-58-1 40mg 阿替卡因标准品
Articaine Hydrochloride 23964-57-0 125mg 盐酸阿替卡因标准品
Articaine Related Compound A 40mg 阿替卡因相关物质A标准品
Articaine Related Compound E 40mg 阿替卡因相关物质E标准品
Ascorbic Acid (Vitamin C) 50-81-7 1g 维生素C标准品
Ascorbyl Palmitate (AS) 137-66-6 2g 维生素C棕榈酸酯标准品
