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公司新闻
NK细胞的高效制备方法
点击次数：1522发布时间：2017/12/6 10:30:13
NK细胞的高效制备方法，即通过联合细胞因子和饲养细胞的刺激作用，提高NK细胞的增殖速度和纯度。本发明的主要特点是：NCR3LG1和m?IL-15同时转染到K562细胞，m?IL-15可以调节NK细胞的活化和增殖，而NCR3LG1作为NK细胞表面主要的活化受体之一NKp30的配体，可以有效的刺激NK细胞活化，且两者有协同作用。本发明首次提供出一种联合饲养细胞和游离因子共同培养制备NK细胞的方法。
1.NK 细胞的制备：悬浮NK 于接种培养液中，细胞浓度调至106/ml。
2.培养基接种NK 细胞
1）于4℃用300×g 离心饲养细胞12min。
2）被离心的饲养细胞悬浮于饲养培养液中，细胞浓度调至2×106/ml。
3）用强度5000radγ射线照射饲养细胞，于4℃用300×g 离心饲养细胞12min，将离心细胞再悬浮于饲养细胞培养液中，饲养细胞浓度调至2×106/ml。
4）在6 块96 孔培养板的各孔中加100μl 上述饲养细胞悬液（总量用60ml 饲养细胞悬液，含1．2×108 个饲养细胞）。
5）将96 孔板置37℃孵箱预温，直到加入NK 细胞。
6）将NK 细胞悬浮于接种培养基液中，并于预温的96 孔板中加入100μlNK 细胞，使成为10 细胞/孔、5 细胞/孔和2．5 细胞/孔的三种类型板，而且每种类型重复二块板。
7）将培养板置5％CO2 孵箱中37℃培养。
HPLC≥98% 银杏内酯A 20mg/支 GinkgolideA
HPLC≥98% 银杏内酯B 20mg/支 GinkgolideB
HPLC≥98% 银杏内酯C 20mg/支 GinkgolideC
HPLC≥98% 白果内酯 20mg/支 Bilobalide
HPLC≥98% 斑蝥素 20mg/支 Cantharidin
HPLC≥98% 去甲斑蝥素 20mg/支 Norcantharidin
HPLC≥98% 植酸 20mg/支 Phytic acid
HPLC≥98% 龙胆苦苷 20mg/支 gentiopicrin
HPLC≥98% 胆酸 20mg/支 Cholic acid
