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技术文章
通用探针法荧光PCR检测试剂盒实验过程
点击次数：3244 发布时间：2022/4/26 14:53:51
通用探针法荧光PCR检测试剂盒实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃chang期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
包纳米虫属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
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支气管败血波氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
副百日咳波氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
百日咳波氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
波氏杆菌（博代氏杆菌）通用探针法荧光定量PCR试剂盒
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鹅疏螺旋体（鹅包柔螺旋体）探针法荧光定量PCR试剂盒
伯氏疏螺旋体（伯氏包柔螺旋体）探针法荧光定量PCR试剂盒
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伽氏疏螺旋体（伽氏包柔螺旋体）探针法荧光定量PCR试剂盒
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疏螺旋体（包柔螺旋体）通用探针法荧光定量PCR试剂盒
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原创作者：上海谷研实业有限公司
