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技术文章
荞麦源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤
点击次数：3310 发布时间：2022/3/17 15:09:11
荞麦源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃chang期保存。
4PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯fang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
原创作者：上海谷研实业有限公司
