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技术文章
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒样本处理
点击次数：3160 发布时间：2021/11/24 14:52:26
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒样本处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL提取液和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2 将匀浆液600g，4℃离心5min。
3将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS。
5在沉淀中加入200μL试剂一和2μL试剂二，反复吹打充分混匀，用于CS测定。
6 柠檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热10min左右（bao证无沉淀）
3、操作表： 在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入。
加试剂六的同时开始计时，记录412nm波长下10时的初始吸光度A1，之后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中准确反应2分钟（96孔板放入恒温箱中）；迅速取出比色皿并擦干，412nm下记录2分10时的吸光度A2，上清液、沉淀的测定管、对照管均需测量(每个样本需测4管)。 计算上清液的测定管ΔA1=A2-A1，上清液对照管的ΔA1’=A2-A1，沉淀的测定管ΔA2=A2-A1，沉淀的对照管ΔA2’=A2-A1，计算ΔA上清=ΔA1-ΔA1’，计算ΔA沉淀=ΔA2-ΔA2’。
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热10min左右（bao证无沉淀）
3、操作表： 在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入。
加试剂六的同时开始计时，记录412nm波长下10时的初始吸光度A1，之后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中准确反应2分钟（96孔板放入恒温箱中）；迅速取出比色皿并擦干，412nm下记录2分10时的吸光度A2，上清液、沉淀的测定管、对照管均需测量(每个样本需测4管)。 计算上清液的测定管ΔA1=A2-A1，上清液对照管的ΔA1’=A2-A1，沉淀的测定管ΔA2=A2-A1，沉淀的对照管ΔA2’=A2-A1，计算ΔA上清=ΔA1-ΔA1’，计算ΔA沉淀=ΔA2-ΔA2’。
MCF-7（MCF7）（ATCC来源）, 人乳腺癌细胞
MDA-MB-231（ATCC来源）, 人乳腺癌细胞
Raji，人Burkitt＇s淋巴瘤细胞
Saos-2，人成骨肉瘤细胞
Caco-2，人结直肠腺癌细胞
NCI-N87 [N87]人胃癌细胞
MGC80-3（MGC-803）人胃癌细胞
EC109，人食管癌细胞
HGC-27人胃癌细胞
AGS人胃腺癌细胞
U251人胶质瘤细胞
THP-1人单核白血病细胞
HuH-7人肝癌细胞
RBE, 人肝胆管癌细胞
MiaPaCa-2, 人胰腺癌细胞
KM3, 人多发性骨髓瘤细胞
QGY-7701, 人肝癌细胞
PANC-1, 人胰腺癌细胞
U266B1 [U266], 人多发性骨髓瘤细胞
Hep G2, 人肝癌细胞系
PC-12(高分化)，PC12，大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(高分化)
GH3, 大鼠垂体生长激素腺瘤
Hepa 1-6, 小鼠肝癌细胞
QBC-939, 人胆管癌细胞
B16-F10, 小鼠黑色素瘤高转移细胞
原创作者：上海谷研实业有限公司
