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技术文章
人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1溶解方法
点击次数：3353 发布时间：2021/10/27 14:09:45
人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1溶解方法：
方法1：我们的抗体（冻干粉）已经包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐剂（叠氮钠或庆大霉素），您只需要加入灭菌的双蒸水就行了。抗体溶解后，置于-20℃保存，zui好分装后使用，避免反复冻融，可bao证至少1年有效；
方法2：也可以只加入一半体积的双蒸水，再用一半体积的甘油补足，置于-20℃保存，这样抗体不会冻，有利于抗体的稳定。后续试验时，再使用对应的缓冲液稀释成工作液，即用即配。我们的抗体（冻干粉），在常温放置下，至少一个月有效；若在-20℃下保存（推荐），至少三年有效。
抗体修复方式：
方法1：沸水浴修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境，保持外部沸腾状态15min，自然冷却至室温；
方法2：微波修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷却至室温。
酶标抗体效价测定程序：各种HRP酶标记成抗体的效价测定程序如下（如：羊抗鼠IgG-HRP的效价测定）：
1、抗原包板：15ug/ml 小鼠IgG-pH9.6·CB液 0.1ml/孔；
2、37°C包被60min或4°C过；
3、PBST洗板3次，5min/次；
4、加入倍比稀释的HRP标记抗体 0.1ml/孔；
5、37°C 30min；
6、PBST洗板5min/次×3；
7、底物液0.1ml/孔 37°C 5-10min；
8、终止液：2N H2SO4 0.05ml/孔；
9、450nm 测定OD值；
10、阳性OD值比对照值大3倍，为判断效价稀释度。
小鼠子宫颈癌细胞；U14
绿色荧光蛋白标记小鼠子宫颈癌细胞；U14-GFP
小鼠浆细胞瘤；MPC-11
小鼠胚胎成纤维细胞；PA317
转PYTL基因小鼠睾丸支持细胞；15P-1
BALB/C小鼠肝上皮细胞；BNL 1ME A.7R.1
小鼠结肠癌细胞；CT26.WT [CT26WT]
小鼠睾丸畸胎瘤细胞；F9
小鼠网织细胞肉瘤；M5076
小鼠正常肝细胞；NCTC 1469 [NCTC1469]
小鼠神经母细胞瘤细胞；Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]
正常小鼠睾丸Leydig细胞；TM3
正常小鼠睾丸Sertoli细胞；TM4
615小鼠乳腺癌瘤株；Ca759
615小鼠乳腺癌瘤株；Ca761
615小鼠乳腺癌瘤株；Ca763
615小鼠T细胞性白血病瘤株；L7712
615小鼠T细胞性白血病瘤株；L7912
615小鼠肺癌瘤株；HP615
615小鼠滑膜肉瘤瘤株；ZM755
615小鼠乳头状肺腺癌瘤株；P615
小鼠肝癌瘤株；H22
615小鼠胃癌瘤株；Fc
KM小鼠子宫颈癌瘤株；U14
KM小鼠子宫颈癌瘤株；U27
KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株；LⅡ
KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株；G422
615小鼠网织细胞性白血病瘤株；L615
艾氏腹水瘤瘤株；Ehrlich
T739小鼠肺腺癌瘤株；LA795
原创作者：上海谷研实业有限公司
