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技术文章
大鼠黑色素细胞抗体（MC Ab）ELISA检测试剂盒样本实验准备
点击次数：3088 发布时间：2023/10/11 11:07:06
大鼠黑色素细胞抗体（MC Ab）ELISA检测试剂盒样本实验准备：
ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
（5）培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（6）组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
试剂配制
1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（S Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
原创作者：上海谷研实业有限公司
