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技术文章
猴子内皮素1试剂盒组织提取物相关信息
点击次数：3591 发布时间：2020/9/2 16:22:55
我们知道，elisa试剂盒可分为多种类型测定，是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或ji素的免疫分析技术。 我公司技术部将各种Elisa常用方法的优势劣势进行对比，您知道ELISA试剂盒许多重要的环节都会影响到ELISA试剂盒检测的质量吗？下面我公司技术人员与大家唠唠猴子内皮素1试剂盒组织提取物相关信息
1.用干净的工具解剖组织，best在冰上、尽快进行，以防止被蛋白酶降解。
2.将组织置于圆底的微量离心管中，并浸入液氮中 “速冻”。将样品保存在 -80℃ 以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆。
3.对于约 5 mg 的组织块，可向管中添加约 300 µl 完全提取缓冲液（查看细胞/组织提取缓冲液配方），然后用电动匀浆器匀浆。
4.清洗刀片两次，每次清洗使用 300µl 完全提取缓冲液，然后在 4℃ 下维持恒定搅拌 2 小时（例如置于冷室中的回旋振荡器上）。
5.4℃ 13,000 x rpm 离心 20 分钟。置于冰上，将上清液（这里是指可溶的蛋白质提取物）分装至新、预冷的管中并在 -80℃ 保存。避免反复冻融。
裂解缓冲液的体积必须根据所用组织的量进行确定。最终蛋白质提取物的浓度一般 > 1 mg/mL。
细胞/组织提取缓冲液配方：
100 mM Tris，pH 7.4
150 mM NaCl
1 mM EGTA
1 mM EDTA
1% Triton X-100
0.5% 脱氧胆酸钠
制备完全提取缓冲液所需的其它试剂：
磷酸酶抑制剂混合物
蛋白酶抑制剂混合物
PMSF
使用前，按照厂家描述加入磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合物以及终浓度为1mM的PMSF。
通用建议
1.推荐的蛋白质提取物浓度为至少 1-2 mg/mL。
2.通常，可用缓冲液将血清、血浆、细胞和组织提取物稀释2倍。
3.样品融化后，使用前，将样品在 4℃ 10,000 x rpm 离心 5 分钟以除去沉淀。
原创作者：上海谷研实业有限公司
