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技术文章
人类胚胎干细胞BG01V干细胞培养方法及优点
点击次数：3802 发布时间：2020/6/4 14:38:30
人类胚胎干细胞BG01V干细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
加入2ml0.25%胰酶T25瓶，使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶T25瓶
1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
细胞培养的优点：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是细胞。
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分细胞的情况，包括细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
原创作者：上海谷研实业有限公司
