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技术文章
如何对细胞进行分级分离？
点击次数：4260 发布时间：2018/9/11 10:35:49
如何对细胞进行分级分离取决于很多因素，包括哪些仪器、知识可以利用，您想要分离什么，以及这些组分的下游应用是什么。
离心是细胞分级分离中最常用的技术之一，它们单独使用，或与其他方法结合。例如，对于高尔基体或过氧化物酶体，大部分操作都要求高速的密度梯度离心。然而，O’Hara Noonan也指出，超速离心也有一些缺点，包括超速离心机是高价的仪器，有些实验室无法接触到。另外，密度梯度难以倾倒是出了名的，其结果是技术依赖的。
当然，其他的许多组分也可以只利用试剂和台式仪器来富集。供应商开发出一些试剂盒，能方便快捷地带来高度富集的细胞组分。全新设计的Mem-PER Plus试剂盒，能在一小时之内富集完整的膜相关蛋白。
据Sigma-Aldrich的产品专家Michael Moehlenbrock介绍，这类试剂盒的原理在很大程度上是类似的。它们往往使用低渗缓冲液给细胞膜带来压力，然后用等渗的提取缓冲液（带或不带还原剂和蛋白酶抑制剂）来维持感兴趣的细胞器。有时也需要机械裂解或去污剂裂解。“各个不同供应商在细胞分级分离试剂盒的设计上都是一致的，而不同细胞组分的差异在于缓冲液组成、裂解试剂和离心速度，”Moehlenbrock说。
此类试剂盒的价值并不在于某些秘密试剂，而在于QC系统的一致性和重复性。“细胞分级分离的方法已经过充分鉴定，其操作步骤适用于大部分应用，”Moehlenbrock说。“商业化试剂盒为最终用户带来了简便和效率，同时提供了品质保证的安全性。”
原创作者：上海谷研实业有限公司
