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技术文章
评估细胞表面和细胞内标志物的表达
点击次数：4331 发布时间：2018/9/4 10:09:57
尽管流式细胞术（FC）能够可靠地评估细胞表面和细胞内标志物的表达，从而对细胞亚群进行分组，但它不提供蛋白定位的任何信息。成像流式细胞术（IFC）结合了两种高内涵的单细胞鉴定技术，扩展了传统流式细胞术的应用范围。
成像流式细胞术通过对单细胞放大20倍、40倍或60倍来收集每个细胞的数字图像。图像内容可由多达10条荧光通道以及明场和暗场图像来收集。通过观察流式细胞术所收集的亚群背后的细胞内容，可以更充分地鉴定细胞表型。
作者首先建立了一个模型系统来监控人淋巴瘤细胞系HuT102中的FOXO1。通过传统的细胞组分分离和Western blott方法，作者发现这个模型能够检测到FOXO1的定位。在细胞未经处理时，它主要位于细胞核中。之后利用佛波酯/离子霉素（PMA/I）处理，FOXO1的表达逐渐转移到细胞质。而Akt VII抑制剂的处理可逆转这种作用。
然而，这种方法的每个条件都至少需要3x106个细胞，才能准确了解蛋白定位，并且它本身无法解析异质性的细胞群。考虑到这些限制，作者认为成像流式细胞术可能是一种更好的替代方法。
在此，他们利用Amnis Imagestream Mark II成像流式细胞仪（默克公司）和40倍物镜来收集每个样品的10,000个细胞数据。他们利用活细胞/死细胞染料来分离活细胞，利用DAPI来鉴定细胞核，并利用CD4受体检测抗体以及细胞内染色来确定FOXO1的定位。
作者通过计算皮尔森相关系数，利用DAPI和FOXO1的信号来产生相似性得分，表明FOXO1主要定位在细胞核。这一基线建立后，作者开展PMA/I处理、AKT VII抑制剂处理或两者叠加处理，并再次鉴定FOXO1的定位。然后利用人外周血单核细胞来观察PMA/I处理对CD4和CD8细胞群的作用。
总之，这些结果表明成像流式细胞术是确定FOXO1定位的可靠系统。与其他成熟方法相比，它需要的细胞量比较少，并且能够在单细胞亚群中定位FOXO1的表达。这对于淋巴细胞减少症的患者来说至关重要。此外，这种技术可在384孔/1536孔板中实现许多高通量的应用。
原创作者：上海谷研实业有限公司
