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技术文章
EB病毒转化的人B淋巴细胞操作步骤
点击次数：3174 发布时间：2022/11/10 14:50:41
EB病毒转化的人B淋巴细胞操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
Bcl-2抗体
脑转录因子4蛋白抗体
胆盐激活脂肪酶抗体
3-羟丁酸脱氢酶抗体
长链脂肪酸酰基辅酶A水解酶抗体
磷酸化乳腺癌易感基因1抗体
磷酸化β分泌酶抗体
磷酸化相关死亡促进因子抗体
磷酸化相关死亡促进因子抗体
磷酸化Bcl-2抗体
磷酸化乳腺癌易感基因1抗体
磷酸化乳腺癌易感基因1抗体
磷酸化非受体性蛋白酪氨酸激酶ETK抗体
磷酸化B-Raf抗体
乳腺癌易感基因相互作用蛋白1抗体
磷酸化乳腺癌易感基因相互作用蛋白1抗体
磷酸化相关死亡促进因子抗体
磷酸化BH3结构域凋亡诱导蛋白抗体
磷酸化BH3结构域凋亡诱导蛋白抗体
磷酸化B-Raf抗体
磷酸化B-Raf抗体
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