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DNA探针标记试剂盒(DOP-PCR法 自备标记核苷酸)
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详细内容
产品英文名称:DNA Probe RCA Rolling Circle Amplification Labeling Kit
产品分类:分子生物学试剂
纯度/规格:5T
保存:-20℃,有效期1年。
产品简介:
滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)是新近发展起来的一种恒 温核酸扩增方法。以环状 DNA 为模板,通过一个短的 DNA 引物(与部分环状模板互补),在 phi29 DNA 聚合酶催化下将 dNTPs 转变成单链 DNA,此单链 DNA 包含成百上千个重复的模板 互补片段。这种方法不仅可以直接扩增 DNA 和 RNA,还可以实现对靶核酸的信号放大,灵敏 度达到一个拷贝的核酸分子,因此在核酸检测中具有很大的应用价值和潜力。本试剂盒配置 的 phi29 DNA 聚合酶具有链置换和连续合成特性,可连续合成长达 70kb 的 DNA 片段。另外, 该酶具有 3’→5’外切酶校读功能,合成的 DNA 片段保真性高。 试剂盒配备的 Random Hexamers 为 6 碱基随机引物可对目标分子进行指数放大(通常放 大 10000 倍)。
组分:
名称 100T
phi29 DNA Polymerase(20U/μl) 50μl
10×phi29 Buffer 1ml
Yeast Pyrophosphatase(0.1U/μl) 25μl
10mM dNTP Mixture 200μl
25XRandom Hexamer 100μl
操作方法:
1. 配置反应液 10×phi29 Buffer 2.5 μl 10mM dNTP Mixture
2 μl 25XRandom Hexamers 1 μl 模板 DNA 0.01-20ng ddH2O up to 25μl 2. 变性退火:将上述产物置于 PCR 上,93°C 变性 3 min,25°C 5min。
3. 向上述退火产物中加 0.5 μl phi29 DNA Polymerase 和 0.2 μl Yeast Pyrophosphatase, 混合均匀后放置到 30°C 反应 2~16h(根据所需的产物量进行反应时间调整,通常分别在 2h、5h、16h 进行电泳确认)。
4. 反应结束后 65°C 10 min 进行失活反应。
注意:RCA 扩增还可应用于其它缺刻或诊断相应的实验,此时 Random Hexamer 为非必须品。
储存:-20℃可保存 3 年。

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