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DNA探针LAMP标记试剂盒
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详细内容
产品英文名称:DNA Probe LAMP Labeling Kit
产品分类:分子生物学试剂
纯度/规格:5T
保存:-20℃,有效期1年。
简介LAMP是一种新型核酸扩增技术,采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物,依赖于BstDNA聚合酶的强链置换活性,在30~60分钟内DNA扩增可达109~1010倍。LAMP检测方法分为多种,包括染料法、浊度法、电泳法及的TaqMan荧光探针法。应用通用型LAMP试剂盒(UniversalLAMPAmplificationKi)提供了更简单、更快速和更高质量的方法,包括质粒提取、胶回收、PCR产物纯化、基因组提取、RNA分离纯化、PCR/RT-PCR、荧光定量、克隆载体和感受态细胞制备等数百种实验常用试剂盒。
产品特点
本试剂盒可以用于LAMP等温扩增,LAMP即Loop-MediatedIsothermalAmplification(环介导等温扩增),是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶,在等温条件下(63℃左右)30-60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术,同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程,不依赖任何门的仪器设备。目已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。
使用方法
1.LAMPOTGReagent为干粉形式,包含Bst4.0DNA聚合酶、dNTP等,在未溶解,该制品可-20℃长期保存,并可室温运输,性能无下降。使用每瓶用0.75mL的LAMPBuffer溶解后,可立即使用,剩余试剂可在-20℃保存1个月,在-60℃以下长期保存。
2.OTG染料已经预先加入在EP管盖上,为干粉形式,其牢固的结合在管盖上,仅有反应完毕后,将EP管倒置后才能将其溶解,溶解后其将立即终止LAMP反应,并与LAMP反应产物形成鲜亮的绿色可见光。在配制反应液和反应过程中务必不能将EP管盖上的染料混入反应液中,否则会导致LAMP反应终止。
3.在0.2mLEP反应管中加入各成分配制反应体系。
注:①全部试剂加入完毕后,轻弹EP管底部后,再盖上含OTG染料的EP管盖(盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置,以防止将管盖上的OTG染料溶解,OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应)。②次实验时LAMPPrimerMix分别采用1、1.5、2μL,以阴性不变色,阳性样品正常变色为标准,作为后续测试用量。4.反应体系配好后,置于60~65℃(次实验采用60℃)进行反应20~45min(扩增良好的引物组合,通常25min即可变色,一般不超过45min,次实验设置20、25、30、45min)。5.观察结果:观察结果时,尽可能不要与配制反应空间共用,以防止污染操作台。将反应EP管倒置,并手腕轻甩,反应液浸泡EP管盖上的OTG染料,静置30s。再将EP反应管正置,并轻甩反应液到EP管底部,此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色,而阴性未发生扩增的管将为深橙色。(在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开,否则可能会导致气溶胶污染)。一旦发生气溶胶污染,请使用百奥莱博公司的DNA污染去除剂进行环境清理。

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