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公司新闻
pUC18 和 pUC19质粒图谱详细说明
点击次数：3745发布时间：2022/11/17 11:41:54
pUC18 和 pUC19质粒图谱
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱 。
这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。
特征序列区位：
&NBS p;
pBR322_origin&NBS p;1471 - 852
Ampicillin2486 - 1626
lac_promoter543 - 514
AmpR_promoter2556 - 2528
M13_pUC_rev_primer500 - 478
M13_reverse_primer479 - 461
M13_forward20_primer379 - 395
M13_pUC_fwd_primer364 - 386
lacZ_a398 - 250
pGEX_3_primer51 - 29
Orf22486 - 1626
NOS terminator sequence:
ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat
设计引物：
Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位点GGATCC及三个保护碱基)
Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位点GAATTC及三个保护碱基)
请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。如果没有，引物合成后，以任何一种pCAMBIA为模板都能扩增到该终止子序列。
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