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上海岑特生物科技有限公司 主营产品:ELISA试剂盒,质粒定制,各种动物血清,酶联免疫试剂盒,白介素试剂盒,标准品对照品,培养基,抗体,细胞株,微生物,染色液溶液,实验耗材

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资料下载

人组胺(HIS)ELISA检测试剂盒使用说明书

点击次数: 88发布时间:2025/6/25 10:51:22

  • 上 传 者: 上海岑特生物科技有限公司
  • 上传时间: 2025/6/25 10:51:22
  • 文件大小: KB
  • 文件类型: doc
  • 所属分类: 应用方法
  • 下载次数: 4次
  • 查看次数: 88

资料简介:

    本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
    人组胺(HIS)ELISA检测试剂盒使用说明书

    检测原理
    试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被组胺(HIS)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组胺(HIS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

    样品收集、处理及保存方法
    1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
    2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
    3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
    4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
    5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

    自备物品
    .酶标仪(450nm)
    .高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
    .37℃恒温箱

    操作注意事项
    .  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
    .  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
    .  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
    .  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
    .  所有液体组分使用前充分摇匀。

    试剂的准备
    20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

    洗板方法
    .  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
    .  自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

    操作步骤
    .  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
    .  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
    .  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
    .  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
    .  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
    .  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    .  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

    结果判断
    绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

    试剂盒性能
    . 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
    . 灵敏度:最低检测浓度小于0.1ng/mL。
    . 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
    . 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
    . 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
    . 有效期:6个月

    免责声明
    .  试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
    .  严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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